• 败血症的严重程度[时间范围：在包含时]
  败血症的严重程度将使用沙发评分（败血症相关器官衰竭评估）进行评估。范围从0（不太严重）到24（更严重）。
• 败血症的严重程度[时间范围：在包含时]
  败血症的严重程度将使用Apache II评分评估）急性生理和慢性健康评估）范围0（不太严重）至299（更严重）。
• 死亡率[时间范围：30天和1年随访]
• 血小板功能评估[时间范围：纳入时]
  血小板功能将使用血小板聚集法评估。 （在AU中）将评估聚合（在AU中），将评估测量期间曲线的最大高度。
• 血小板功能评估[时间范围：纳入时]
  血小板功能将使用血小板聚集法评估。聚合曲线（AUC）下的区域将被评估并记录为单位或U。
• 血小板功能评估[时间范围：纳入时]
  血小板功能将使用血小板聚集法评估。速度（在AU/min）中，将评估曲线的最大斜率。
• 凝血酶生成标记率[时间范围：在包含时]
  d-dimers（ng/ml）
• 凝血酶生成标记率[时间范围：在包含时]
  尿凝血酶 - 抗凝血酶复合物（NG/mL）
• 微管蛋白乙酰化速率[时间范围：在包含时]
  微管蛋白乙酰化将使用蛋白质印迹评估。结果将以任意单位（AU）表示。
• 总血小板脂质含量和成分[时间范围：在包含时]
  总血小板脂质含量和成分将通过质谱法代谢方法进行评估。倍数变化的估计值和相应的P值是从每个脂质物种和每个预测因子的回归模型中得出的。为了控制多个测试，将对本杰米尼 - 霍克伯格错误发现率（FDR）进一步调整所有P值，而FDR <0.05被认为具有统计学意义
• 中性粒细胞外陷阱形成[时间范围：在包容时]
  髓过氧化物酶MPO（NG/mL）
• 中性粒细胞外陷阱形成[时间范围：在包容时]
  柠檬油的病变3 H3-CIT（NG/mL）
• 血小板激活[时间范围：在包含时]
  可溶性CD62P（NG/mL）
• 呼吸衰竭[时间范围：在包含和通过研究完成时完成至第30天]
  PAO2/fio2

• 败血症的严重程度[时间范围：在包含时]
  败血症的严重程度将使用沙发评分（败血症相关器官衰竭评估）进行评估。范围从0（不太严重）到24（更严重）。
• 败血症的严重程度[时间范围：在包含时]
  败血症的严重程度将使用Apache II评分评估）急性生理和慢性健康评估）范围0（不太严重）至299（更严重）。
• 死亡率[时间范围：30天和1年随访]
• 血小板功能评估[时间范围：纳入时]
  血小板功能将使用血小板聚集法评估。 （在AU中）将评估聚合（在AU中），将评估测量期间曲线的最大高度。
• 血小板功能评估[时间范围：纳入时]
  血小板功能将使用血小板聚集法评估。聚合曲线（AUC）下的区域将被评估并记录为单位或U。
• 血小板功能评估[时间范围：纳入时]
  血小板功能将使用血小板聚集法评估。速度（在AU/min）中，将评估曲线的最大斜率。
• 凝血酶生成标记率[时间范围：在包含时]
  d-dimers（ng/ml）
• 凝血酶生成标记率[时间范围：在包含时]
  尿凝血酶 - 抗凝血酶复合物（NG/mL）
• 微管蛋白乙酰化速率[时间范围：在包含时]
  微管蛋白乙酰化将使用蛋白质印迹评估。结果将以任意单位（AU）表示。
• 总血小板脂质含量和成分[时间范围：在包含时]
  总血小板脂质含量和成分将通过质谱法代谢方法进行评估。倍数变化的估计值和相应的P值是从每个脂质物种和每个预测因子的回归模型中得出的。为了控制多个测试，将对本杰米尼 - 霍克伯格错误发现率（FDR）进一步调整所有P值，而FDR <0.05被认为具有统计学意义

背景

败血症是一种响应感染的全身性炎症反应，是一个主要的公共卫生问题，被认为是重症监护病房（ICU）的主要死亡原因。这种严重的炎症反应会导致内皮激活和功能障碍。这种现象与内皮细胞表面的组织因子（TF）的凝血级联反应密切相关。 TF充当凝结VII和X因子的锚点，允许其激活。这导致凝血酶（IIA）产生和纤维蛋白产生。

凝血酶也是一种有效的血小板激动剂（激活剂），导致血小板激活和消耗。败血症期间活化血小板的促凝活性增强了微栓塞形成，损害了器官灌注并可能导致死亡。血小板减少症很常见，在败血性休克患者中是强烈的阴性预后标记。

除凝血之外，已知血小板在炎症和免疫反应中起关键作用。血小板激活可以通过发炎的内皮或循环炎性细胞因子来引发，这又可以调节炎症和血栓反应。活化的血小板与免疫细胞相互作用，例如中性粒细胞。此外，血小板可以通过表达Toll样受体（TLRS）家族的成员来充当微生物“传感器”，并结合了几种感染剂的配体。最近的数据突出了血小板和中性粒细胞外陷阱（网）之间的相互作用。血小板促进网状形成，并成反比净激活血小板。网络连接血小板，血栓形成，免疫反应和炎症，因此在化粪池中特别感兴趣。

血小板表达乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1），这是脂肪生成的第一步。 AMP激活的蛋白激酶（AMPK）对丝氨酸79的ACC磷酸化导致其抑制作用，并且AMPK被凝血酶激活。我们证明了AMPK-ACC轴控制血小板磷脂含量，这些含量会影响TXA2和致密颗粒释放，进而影响血栓形成。 TXA2是由含有花生四烯酸（AA）的磷脂产生的。或者，可以通过产生脂氧蛋白（LX）和Resolvin的脂氧酶（LOX）途径代谢AA，这些途径与炎症的分辨率有关。从未研究过AMPK-ACC信号传导与lipooxygyase途径之间的关系。

研究假设

知道败血症期间凝血酶产生的急剧增加，我们的研究假设是AMPK诱导的血小板中ACC磷酸化的增加增加了，这可能会调节血小板的代谢，尤其是血小板炎症介质含量，来自AA和脂质。

患者选择

将包括在布鲁塞尔圣卢克大学（Cinchiques Univers）接受败血性休克的连续患者（实验组）

基于对ICU入院的患者的回顾性分析，对照组将对应于具有匹配年龄和性别的健康志愿者。

探索对照组将与重症监护病房中接纳的患者相对应，而没有严重感染和严重的全身炎症反应的证据。神经系统障碍和中毒的患者将是目标人群。

在对照组中，类似的排除标准将与实验组相同。

材料与方法

研究的类型前瞻性，单中心，介入研究。

在化粪池休克诊断后的48小时内，将在静脉导管插入后收集血液样本。

在该过程中将采集以下样本：

• 凝血包括（INR，TCA，TT，PTT，纤维蛋白原，ddimers）（1绿色管为3 ml）
• 乘数分析（1橙管为3毫升）
• 血小板蛋白分析的血液样本（包括ACC磷酸化）。血小板隔离后，剩余的血浆将被冷冻（2个管CPDA为8.5 mL）。
• 尿样。

数据收集数据将从医疗资源管理器和Q护理中收集，包括在ICU中常规执行的生物学数据，因为血小板计数，CRP水平，凝结评估，肾功能和肝脏酶学。随访将至少3年进行，并且不会计划额外访问。随访期间记录的事件将从医疗资源管理器中获得，如果数据丢失，将进行电话。

测量

• 血细胞计数包括血小板。
• 通过Western印迹，ECLIA的ACC磷酸化。
• 血小板蛋白提取物用于蛋白质乙酰化。
• 血小板函数使用倍增分析。
• 血浆采样。
• 血小板脂肪组学分析。 ACC磷酸化分析
• 离心后将获得富含等离子体的平台（PRP）。添加兴奋含量和整合素以限制制备过程中的血小板激活。 PRP将分为3个样品，在400 g离心10分钟后，血小板将沉淀。
• 3个血小板样品之一将用LEMLI溶液裂解，用于磷酸化ACC，ACC1和磷酸化蛋白激酶C底物的蛋白质印迹分析。然后，所有样品将在-80°C下库存。为了比较不同的免疫印迹，在凝血酶刺激后获得对照血小板样品。每个患者的血小板样品将与同一对照样品进行比较。每位患者的磷酸化ACC的信号将通过图像j（rasband，ws，imagej，美国国家卫生研究院，贝塞斯达，美国马里兰州，美国，http：//imagej.nih.gov/ij/，19977-2014）进行量化。并将表示为控制样品信号的一部分。
• 磷酸化ACC的水平将通过电化学发光（ECLIA，MESO量表发现）和流式细胞仪（FACS）证实。
• 蛋白质提取物将用于使用免疫印迹进行血小板蛋白质分析。

血浆采样

• 凝血标记包括INR，TCA，TT，PTT，纤维蛋白原，D-二聚体，凝血酶抗凝血酶复合物（TAT）。
• 细胞因子测量（TNF-Alpha，IL-1B，IL-6，趋化因子-CCL 3、5和18，补体系统）以及炎性生物标志物（过敏性C反应蛋白）。
• 血小板激活生物标志物（SCD62P，SCD40L，CD62P，PF4）（与比利时的Liège大学的C. Oury，Giga博士合作）。
• 纤维蛋白水解生物标志物（U-PA，T-PA和PAI）。
• 脂质组。尿液样品将在测量TX2B产生的血液采样时收集。

脂质分析将与蒙特利尔心脏的克里斯汀·德·罗西尔斯（Christine des Rosiers）合作进行分析。将特别注意来自Cox和Lox途径（TXA2和Lipoxin）的代谢产物。

样本量

根据我们的初步数据，我们确定至少46名患者的入学率将在5％的显着性水平下提供90％的功率，以检测ACC磷酸化的差异为0.15（对照组1和败血性休克种群之间的差异） 。探索对照组预计有20名患者。

COVID -19-研究修正案

自2019年12月以来，新型严重的急性呼吸道综合症冠状病毒2（SARS-COV-2）导致2019年冠状病毒病（COVID-19）从中国的流行病爆发发展为大流行。严重的感染主要导致双侧肺炎，但新兴数据表明，它是一种全身性疾病，涉及多种系统，包括造血和免疫系统。已经显示了内皮激活，凝管状态和微脑栓塞。然而，尚未证明病理生理学与细菌败血症相似，因此在Covid-19患者的亚组中也应研究上述代谢途径。

COVID-19组将与因SARS-COV-2感染和PAO2/FIO2 <200引起的ICU入院患者对应。纳入将在入院后5天内进行，并且将排除细菌共感染的患者。我们计划招募46例患者，类似于对照组和化粪池休克组。

• 败血性冲击
• 血小板信号处理缺陷
• 炎症反应
• 弥散性血管内凝血
• 新冠肺炎
• 中性粒细胞外陷阱形成

• 实验：败血性休克
  入院ICU的败血性休克患者
  干预：其他：评估凝血病，血小板激活和血小板 - 中性基质相互作用
• 控制组
  在医院中央实验室招募的患者，年龄，性别和合并症
  干预：其他：评估凝血病，血小板激活和血小板 - 中性基质相互作用
• 实验：COVID-19
  COVID-19患者接受ICU的患者患有PAO2/FIO2 <200的急性呼吸窘迫综合征
  干预：其他：评估凝血病，血小板激活和血小板 - 中性基质相互作用

纳入标准：

• 患者，亲戚或独立医生的知情同意
• 败血性休克被定义为具有加压剂治疗的败血症，尽管在6小时内将30ml/kg的静脉内晶体固醇复苏了30mL/kg的液体复苏，但仍需要升高地图≥65mmHg和乳酸> 2 mmol/L。入院48小时内包含。
• COVID-19患者ARDS和PAO2/FIO2 <200。在ICU入院后5天内纳入。

排除标准：

• 接受治疗性抗凝治疗（口服或肠胃外）的患者，包括肝素，维生素K拮抗剂，新型口服抗凝剂，尽管有任何治疗性抗凝治疗，但作为COVID-19患者的治疗方法。
• 最近（少于1个月）的化学疗法
• 主动炎症性疾病
• 血友病和其他凝血病
• 血小板减少症的先前史（<100 000血小板/mm3）
• 肝硬化（儿童插头> A）
• 最近（不到48小时）的大手术

COVID-19患者的排除标准：

- 细菌共感染