• 总胆固醇水平[时间范围：评估在0、33和66天。第0天和第66天报告。这是给出的
  根据制造商的规格，总胆固醇是通过商用套件分析的。在时间0（开始研究时），33天（33天后）和66（66天后）（66天后）时，分析了志愿者的总胆固醇和甘油三酸酯水平。
• 甘油三酸酯水平[时间范围：在0、33和66天评估。第0天和第66天报告。这是给出的
  根据制造商的规格，通过商业套件对甘油三酸酯水平进行了分析。在时间0（开始研究时），33天（33天后）和66（66天后）（66天后）时，分析了志愿者的总胆固醇和甘油三酸酯水平。

• 氧化应激：过氧化氢酶[时间范围：在0、33和66天评估。第0天和第66天报告。这是给出的
  过氧化氢酶的活性基于在240 nm处监测的H2O2的分解。每分钟变异或变异系数的常数有助于过氧化酶（κ/min）的表达。该酶有责任分解过氧化氢。更高的分数意味着更好的结果。在时间0（开始研究时），在33天（33天后）和66天（66天后）分析。
• 氧化应激：减少谷胱甘肽（GSH）[时间框架：在0、33和66天评估。第0天和第66天报告。这是给出的
  在时间0（研究开始时），第33天（33天后）和66时（66天后）（66天后）的志愿者样本中分析了谷胱甘肽的减少。
• 氧化应激：硫代吡啶甲酸反应性物质（TBARS）[时间框架：在0、33和66天评估。第0天和第66天报告。这是给出的
  在时间0（研究开始时），时间为33时（33天后）和66（66天后），在志愿者的样本中分析了对硫巴比妥酸的反应性物质。

研究设计该研究的主要结果是胆固醇血症，如由总胆固醇水平，甘油三酸酯或低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）评估。次要结果包括血糖，体重指数（BMI）和氧化应激生物标志物。

从2018年9月至2018年12月进行了一项前瞻性II期，随机，双盲和安慰剂对照试验。该研究在巴西圣保罗州立大学（UNISO）进行了研究。根据国家卫生委员会的第466/2012号决议（Brasil，2012年）和研究伦理学审查委员会（ERC），索罗卡巴大学的人类研究伦理委员会（协议编号2.824.297）批准了这项研究（附件D）（协议编号为2.824.297）。 （WHO，2016年）。

招募个人招募个人，该披露是在第二阶段试验开始前五个月开始的。该研究发表在索罗卡巴大学（UNISO）的网站上，在校园中分发的社交媒体和文件夹上，其中包含有关研究，包容和排除标准的简要说明，以及研究人员的联系。根据第1.170号决议，来自ANVISA（国家卫生监测机构），不允许少于12人进行研究；但是，该机构建议使用至少24名志愿者。

资格标准共有165个人完成了Google在线调查。

• 两种性别的纳入标准个体，年龄从20至65岁之间招募到200 mg/dl），通过生化考试诊断，近期招募日期。宽容棒成分和shiitake。参加血液收集日期和时间的可用性。
• 但是，排除标准，其中一些患有癌症，心脏病，神经退行性疾病，糖尿病等疾病。这些疾病可以被视为研究的混杂因素，一些被招募的人必须被排除在外。怀孕，哺乳或激素替代女性也无法参加。

指示个人在研究过程中不要改变他们的饮食习惯和模式，体育活动水平或口服避孕药，从而仅确定shiitake对每个人在暴露组中添加的饮食的影响。

研究干预措施。该研究正式从68个人开始，他们签署了知情的同意期限。在第一次（时间0 -T0）中，在第二次（时间33天-T33）和第三次（时间为66天-T66）会议中，受试者接受了营养评估和解剖学，对饮食习惯进行了24小时的回忆和饮食频率。

在研究的第一个月中，生产了4,100个安慰剂或蘑菇棒，在第二个月中，生产为3500栏。根据Grotto和合作者（2015年）的研究，进行了一项研究，评估了不同的散次浓度（100、400和800 mg/kg/day），以确定动物的毒性程度。已证明100 mg/kg/天的shiitake浓度是安全的。此外，在先前研究的感觉分析和购买意图中批准了Shiitake Sweet Bar配方。

随机化个人（68）被随机分配（使用随机数表）分为2组：I-安慰剂组（n = 32）和II-干预组（n = 36）。为了确保每天建议摄入100 mg/kg/天的shiitake，每个参与者都会加权以确定每天消耗的酒吧数量。

营养评估和血液收集后的个人接受了未鉴定的不透明和密封的包装，其中包含单独的真空棒，持续了T33天。患者和数据收集器是盲目的。干预措施和安慰剂组的棒在质地，风味，香气和外观上相似。

一个月后，所有人返回索罗卡巴大学进行新的营养评估，并通过相同的双盲护理获得更多的食物棒和血液收集（T33）。在六十六天结束时（T66），受试者返回了最后的血液收集和最终营养评估。

生化分析总胆固醇，LDL胆固醇，HDL胆固醇，甘油三酸酯和葡萄糖通过商用试剂盒根据制造商的规格，在自动化设备Cobas C111（Roche®）中根据下面的方法分析。

对于胆固醇，通过脂蛋白脂肪酶，将10 µL样品和1.0 mL酶试剂混合10分钟，以使其总转化为游离胆固醇。该反应涉及胆固醇氧化酶对胆固醇-3-one和H2O2的氧化。并且过氧化物酶对苯酚的作用与4-氨基氨基吡啶形成了樱桃成色，其颜色与胆固醇的浓度成正比。

为了测定HDL，将血清用磷酸苯乙酸和氯化镁处理。因此，在10.000 rpm离心2分钟后，将LDL从馏分中沉淀出来。保留在上清液中的HDL是根据胆固醇方法进行的。 HDL浓度与颜色成正比。通过从总胆固醇中减去HDL胆固醇来计算LDL。

通过脂蛋白脂肪酶将血清甘油三酸酯水解为甘油和游离脂肪酸。在三磷酸腺苷（ATP）和甘油激酶的存在下，磷酸甘油-3-磷酸磷酸盐被磷酸化，通过磷酸甘油氧化酶将其氧化为丙酮二氢磷酸盐和H2O2。 H2O2，4-氨基氨基吡啶和P-氯苯酚在37ºC的水浴中通过过氧化物酶报告了上述相同的反应过程，持续10分钟，直到形成红色。

为了进行血糖测试，在葡萄糖酸6-磷酸中NADP存在下，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶氧化了6-磷酸。没有其他碳水化合物被氧化。反应过程中NADPH形成的速率与葡萄糖浓度成正比，以光度计量确定。

氧化应激分析通过定量基于硫醇减少的总硫醇来确定减少的谷胱甘肽（GSH）。为此，将150 µL的血液用100 µL 10％Triton X-100和100 µL 30％TCA涡旋，然后在4000 rpm下离心10分钟。在900 µL的1M TFK，50 µL上清液和50 µL 10 mM DTNB中，将其反应形成黄色的复合物。在分光光度计中以412 nm的形式获取读数。为了计算浓度，使用了预定义GSH浓度（0.005; 0.01; 0.025; 0.05; 0.05; 0.1 mm）的校准曲线。

为了评估过氧化氢酶的活性，根据过氧化氢酶对H2O2的分解，在240 nm处进行了监测。为此，在50 mM TFK中将血液稀释60次。将20μl的等分试样混合到1910μl相同的TFK，并加入70μl的H2O2，启动监测反应三分钟。每分钟变异常数（κ）有助于过氧化酶（κ/min）的表达。

将硫代妥二硫酸反应性物质（TBAR）用作脂质过氧化的生物标志物。与50 µL NaOH和50 µL Milli-Q超纯水（Direct 8，Millipore®）混合血浆等分试样（150 µL），并在60°C下孵育30分钟。将250 µL的6％H₃PO₄，250 µL 0.8％TBA和100​​ µL的10％SDS添加到样品中，并将其放入80°C浴中一小时。与TBA在酸性培养基中反应的脂质过氧化物形成粉红色化合物，并在532 nm处读取分光光度计。为了计算血浆中的TBAR的浓度，制造了丙二醛的校准曲线，即主要的硫代省硫酸反应性物质（0.28; 0.56; 0.56; 1.7; 3.4; 6.6 µm）。

• 实验：干预组
  干预组：边界胆固醇患者每天消耗两个谷物棒，持续66天。
  干预：其他：Shiitake谷物酒吧
• 安慰剂比较器：安慰剂组
  边缘胆固醇的患者食用两个安慰剂谷物棒66天。
  干预：其他：Shiitake谷物酒吧

纳入标准：

• 年龄在20至65岁之间的个人，都是性别，他们在边界水平上至少具有以下生化标记之一（总胆固醇180至239 mg/dl; ldl 130至159 mg/dl;甘油三酸酯的150至200 Mg/dl），招募，通过生化考试诊断，近期至招募当天的日期。宽容棒成分和shiitake。参加血液收集日期和时间的可用性。

排除标准：

• 但是，其中一些患有癌症，心脏病，神经退行性疾病，糖尿病等疾病。这些疾病可以被视为研究的混杂因素，一些被招募的人必须被排除在外。怀孕，哺乳或激素替代女性也无法参加。

指示个人在研究过程中不要改变他们的饮食习惯和模式，体育活动水平或口服避孕药的使用，从而仅确定每个人对每个人在暴露组中添加了饮食的影响