• 克隆注射的生存和持久性[时间范围：注射后60天，注射后6个月，注射后12个月]
  在注射后60天，在血液和骨髓中注射后6和12个月，将通过PCR（聚合酶链反应）跟踪克隆的生存率（聚合酶链反应）
• 免疫重建[时间范围：克隆注射的日期，克隆注射后30天，克隆注射后60天，克隆注射后9个月，克隆注射12个月后）
  T细胞重构将通过测量CD4+，CD8+的自然杀伤细胞的水平来评估
• 复发的发病率[时间范围：同种异体后12个月]
  复发的累积发生率
• 生存[时间范围：同种异体移植后12个月]
  事件免费生存，整体生存
• GVHD发病率[时间范围：同种异体移植后12个月]
  急性和慢性GVHD的累积发生率
• 死亡率[时间范围：同种异体移植后12个月]
  死亡与复发无关
• 完全缓解[时间范围：同种异体移植后12个月]
  对于同种异体移植前的部分反应淋巴瘤患者
• 克隆的副作用[时间范围：同种异体移植后12个月]
  与克隆有关的事件（GVHD除外）

几十年来，同种异性造血干细胞转植物（Allo-HSCT）一直是高危血液恶性肿瘤患者的管理中的重要策略。接受脐带血（UCBT）和单倍性移植物（HAPLO）作为Allo-HSCT的可行替代供体增加了无匹配供体的患者的选择，现在可以确保几乎所有患者都可以确定捐助者的选择。复发性疾病是对这些患者的主要威胁，影响其中30％。这些复发患者的治疗选择是多种多样的，但在改变其长期结局方面仍然无效。因此，考虑了Allo-HSCT后的先发制人治疗。

MHC（主要的组织相容性复合物）II类分子是通常仅在造血细胞上发现的分子家族。细胞表面蛋白负责人类免疫系统的调节，并且在疾病防御中很重要。

它们是器官移植拒绝的主要原因。一般人群中存在不同的HLA-DPB1等位基因。 HLA-DPB1*04：01是最常见的（70.5％），而HLA-DPB1*02：01代表32％和HLA-DPB1*03：01 20％。在Allo-HSCT中，供体和受体可以表达不同的HLA-DPB1分子。 HLA-DPB1匹配状态对GVL（移植物与白血病）和GVHD有影响。在HSCT的接受者中，DPB1的匹配与疾病复发的风险显着增加，无论其他HLA分子的匹配状态如何。 GVHD。

HLA-DP特异性T细胞可以识别并裂解表达HLA-DP的B细胞和髓样恶性肿瘤。大多数白血病细胞（急性髓样白血病，急性淋巴白血病，慢性淋巴白血病）表达HLA-DP。在识别特异性HLA-DPB1*0401的细胞克隆中，已开发为永久细胞系，该克隆已被证明能够杀死HLA-DPB1*0401阳性白血病细胞。此外，该克隆携带了一种特殊的自杀基因，允许在存在一种名为Ganciclovir的特定抗病毒药物的情况下破坏克隆。

我们假设注入针对HLA-DPB1*401的第三方自杀基因转移的T细胞克隆可能可以防止血液恶性肿瘤的复发。

我们建议在移植后4至5个月的第三方克隆剂量升级第三方克隆（识别HLA-DPB1*04：01，4至5个月）患者HLA-DPB1*04：01患者的供体HLA-HLA--HLA-阳性DPB1*04：01负面评估这种免疫干预的可行性，毒性和益处。

尽管移植肿瘤效应，但复发仍然是Allo-HSCT接受者发病和死亡率的主要原因之一。 Allo-HSCT后40％至50％的死亡是由于疾病复发引起的。在复发的情况下，预后非常差，疾病负担仍然是仅使用过继细胞疗法的挑战。在移植后复发的情况下，三年的总生存期（OS）令人沮丧。移植后期的特征是免疫缺陷的长期阶段，导致感染脆弱性增加和复发风险。因此，现在考虑为CR中患者（完全缓解）的患者维持或先发制人疗法，以防止将来复发。在Allo-HSCT之后，受体HLA抗原的供体T淋巴细胞的识别可能会导致不同的后果。一方面，T细胞可以识别出在恶性细胞上存在的抗原并消除残留疾病或预防肿瘤复发。另一方面，注射未选择的T细胞可能会诱导移植物抗宿主 - 疾病（GVHD）。

HLA-DPB1是在6p21.3染色体上的其他II类基因座的MHC II类分子之一。增加重组事件是在HLA-DP基因座和其他II类基因座之间的区域中发现的，这解释了HLA-DP之间的相对缺乏连锁不平衡（LD）（* HLA-DP（* HLA-DP：人类白细胞抗原（DP等位基因））和其余的MHC单倍型。因此，除其他经典的HLA分子外，很难找到与DPB1匹配的供体。在兄弟姐妹捐助者中，估计不兼容的速度高达10.9％，而在无关的捐助者中，不匹配率可能高达89％。 HLA-DPB1通常不考虑供体选择。但是，HLA-DPB1匹配状态对GVL和GVHD有影响。在HSCT的接受者中，与其他HLA分子的匹配状态无关，DP​​B1的匹配与疾病复发的风险显着增加有关。 HLA II类分子表达主要局限于造血细胞。因此，可以预料，HLA II类不匹配的情况可能会引起无需GVHD的选择性GVL反应性。然而，在暴露于促炎性细胞因子的风险之后，HLA II类表达在各种组织上都可以上调，因为在某些调理方案或感染后是这种情况。

一般人群中不同HLA-DPB1等位基因不同的频率是众所周知的：HLA-DPB1*04：01是最常见的（70.5％）HLA-DPB1*02：01和HLA-DPB1*03：03：01代表32代表32 ％和20％。仅针对HLA-DPB1*04：01、03：01和02:01的三个CTL克隆，可能仅将96％的白血病细胞靶向。

可以通过HLA-DP特异性CD4+细胞（CD4+：分化4+的簇）识别并裂解表达HLA-DP的B细胞和髓样恶性肿瘤。大多数白血病细胞（AML，ALL，CLL）表达HLA-DP。 CD4+细胞毒性T细胞（CTL）克隆可以识别出特异性HLA-DPB1*04：01，并已证明能够杀死HLA-DPB1*04：01阳性白血病细胞。

此外，已经显示出HLA-DP特异性的CD4+ T细胞可以在存在或不存在移植物与宿主疾病的情况下诱导移植物与白血病反应性。在这项研究中，HLA-DP特异性CD4+ T细胞的存在与临床对DLI的反应相关。

INSERM第1232号单元的团队（H.Vié，B。Clemenceau，这两个项目的共同研究器）已经开发了自杀基因转移的CD4+ T细胞克隆，该克隆识别HLA-DPB1*401，这是HLA最常见的HLA -dpb1等位基因由白血病爆炸表达（70％）。 Vivien R等人在详细介绍了该克隆：“ T淋巴细胞的加倍潜力允许临床级产生一群转基因的单克隆T细胞种群”。细胞疗法。 2018年3月; 20（3）：436-452。

几项临床试验已经评估了在Allo-HSCT之后注射供体淋巴细胞以自杀基因转导的供体淋巴细胞，以治疗肿瘤复发或加速免疫重建。尚无急性输注有关的毒性。 Ganciclovir在某些患者中用于控制GVHD，从而迅速消除TK +细胞（酪氨酸激酶 +）。

克隆是通过在两个种群之间进行的混合淋巴细胞培养（MLR）获得的，这些种群仅与HLA-DP不同，随后通过高效率转导反应性T细胞，最后直接克隆它们，然后在选择每个克隆以获得所需特征。得益于临床级疱疹 - 刺激性病毒-TK载体，克隆人拥有自杀基因，并且可以在Ganciclovir（GCV）的情况下杀死。

该克隆在效率和安全性方面提出了几个重要特征。融化后克隆稳定。解冻后可以在体外生长和扩增（至少超过一百万次），同时保持其细胞毒性能力。它大量产生Th1型细胞因子。

关于正在研究的CTL抗ANTIDP的安全性，我们强调了两个主要点：对Ganciclovir的特异性和敏感性：

特异性。克隆特定于HLA-DPB1*04：01。克隆被选择针对HLA-DPB1*04：01的纯合子（并且与HLA-A，B，C，C，DQ，DR相同）。特异性测试证实了HLA-DPB1*：04：01的识别。然而，所描述的HLA-DPB1等位基因是许多（迄今为止的447种蛋白质（IMGT）（免疫原料数据库）/HLA释放，www.ebi.ac.ac.uk/ipd/index.html），只是不可能详尽地预测交叉反应（除了一些针对HLA-DPB1*04：02和HLA-DPB1*05：01以外，已经观察到了针对特定细胞系的）。由于我们处于同种HSCT的背景下，这种风险将是供体细胞的识别，因此是移植排斥的可能性。因此，我们将进行灌注前测试，其中供体细胞将用作克隆的靶标。

对Ganciclovir（GCV）的敏感性：GCV存在下的增殖测试证实了GCV的功效，并根据常规治疗期间达到的GCV血液水平足够的余量。

来自同事的数据显示，在移植后的头几个月中，T细胞数量很少，Treg细胞的相对增加意味着供体T细胞可能不会迅速消除克隆。

可以在以下几点中总结自杀基因转移CD4+ T细胞克隆识别HLA-DPB1*04：01*04：01的原因：

1.血液恶性肿瘤的复发仍然是这些类型的移植中的严重关注。

3.免疫重构非常延迟，允许注射第三方T细胞克隆。

4.如果在输注CTL后进行GVHD，则可以使用Ganciclovir迅速消除CTL克隆。

假设我们假设第三方自杀基因转移的T细胞克隆针对HLA-DPB1*04：01*04：01同种异体移植后可以是安全的，并且可能可以防止血液系统恶性肿瘤的复发

均为HLA-DPB1*04：01和AHLA-DPB1*04：04：01表达血液学恶性肿瘤（几乎是100％的病例）的方法学（必要受试者的数量）候选同种异体移植的患者候选患者的详细描述。 -dpb1*04：01负面，一旦停止了旋风孢菌素和/或霉菌甲酸的莫菲蒂的免疫抑制后，将在移植后4-5个月接受一次T细胞克隆的一次输注。肿瘤细胞的HLA-DPB1*表达将通过细胞术或免疫组织化学检查。克隆对供体细胞的任何可能的交叉反应性也将被排除在外

将使用标准的3 + 3期剂量升级研究：

级别1：1 x 104个细胞/千克的受体，级别2：5 x 104个细胞/千克，级别3：25 x 104牢房/千克，级别4：50 x 104 cells/kg，级别5：100 x 104 cell公斤。

调理方案：无限制

如果有必要，在克隆输注后允许使用混合嵌合或复发的情况下使用DLI。如果急性GVHD后CTL克隆输注，将服用Ganciclovir（以5 mg/kg的剂量两次）14天。

纳入标准：

• 患者HLA-DPB1*04：01阳性，确认诊断为血液学恶性肿瘤（AML，骨髓扩张综合征，全部，非霍奇金的淋巴瘤，霍奇金氏病，CLL），使用HLA-DPB1*04：01*04：04：04：04：04：04：04：捐赠者。
• 移植物可以是PBSC（外周血干细胞）或骨髓。
• 年龄在18-75岁之间的患者。
• 移植时完全缓解的患者或> 50％的反应（淋巴瘤）。
• 使用G-CSF（刺激性因子），没有一个供体，没有任何障碍来动员外周血干细胞
• 国家医疗保健系统的隶属号码
• 克隆对供体细胞的反应性缺乏反应性（由PBMC制备的Pha-blasts）。
• 对于脐带血移植：脐带血必须为HLA-DPB1*04：01负面，脐带血和受体之间的HLA兼容性（A，B，DR）必须为4/6、5/6或6/6。
• ECOG <= 2或Karnofsky> 60％
• 中性粒细胞≥1000细胞/μL和/或血小板≥50000细胞/μL（允许生长因子）

排除标准：

• 怀孕或母乳喂养的女人
• 患者拒绝避孕措施
• 次要的
• 受监护，策展人或司法保护的成年患者
• 克隆注射时间内移植后复发的患者（D100之前）
• Karnofsky性能得分低于60％或ECOG> 2
• 急性和慢性心力衰竭（NYHA III或IV级）或有症状性缺血性心脏病。
• 严重的肝衰竭（胆红素> 30 µmoles/l，SGPT（血清谷氨酸乙酰乙酰乙酰跨激酶）>正常的4 x上限）。
• 肾功能受损（肌酐清除率<30 mL/min）
• 急性GVHD> 1年级
• 主动不受控制的感染。
• 拒绝提供知情同意
• 由研究医师确定的严重神经或精神疾病。
• 同种异体移植后用其他研究药物进行治疗。