• 由于反复的鼻抽样而导致鼻气流的变化[时间范围：1年]
  经过验证的峰值鼻吸气流量计（PNIF）将用于测量鼻粘膜采样后鼻流的变化。
• 使用经过验证的鼻症状评分系统的鼻症状变化[时间范围：1年]
  为了测量鼻粘膜采样后鼻症状的主观变化，将使用包含四个参数的总鼻症状评分（TNSS）；鼻瘙痒，鼻阻塞，打喷嚏和流鼻涕。每个参数从0-3评分，得分较高，表明鼻腔症状负担更高。然后将每个参数的分数添加在一起，以给出最大分数为12的TNSS，最低分数为0。
• 定义基线和采样后细胞因子鼻mRNA水平的差异[时间范围：1年]
  使用经过验证的隆尼诺探针装置将获得鼻组织样品。然后将组织样品处理为RNA，以测量鼻腔抽样前后细胞因子mRNA水平的任何变化，以寻找基因表达的变化

• 由于反复的鼻抽样而导致鼻气流的变化[时间范围：1年]
  经过验证的峰值鼻吸气流量计（PNIF）将用于测量鼻粘膜采样后鼻流的变化。
• 使用经过验证的鼻症状评分系统的鼻症状变化[时间范围：1年]
  为了测量鼻粘膜采样后鼻症状的主观变化，将使用包含四个参数的总鼻症状评分（TNSS）；鼻瘙痒，鼻阻塞，打喷嚏和流鼻涕。
• 定义基线和采样后细胞因子鼻mRNA水平的差异[时间范围：1年]
  使用经过验证的隆尼诺探针装置将获得鼻组织样品。然后将组织样品处理为RNA，以测量鼻腔抽样前后细胞因子mRNA水平的任何变化，以寻找基因表达的变化

过敏性鼻炎（AR）和过敏性哮喘是I型过敏的常见表现，一种IgE介导的超敏反应疾病估计影响了全球人群的40％。 IgE由B细胞产生，并通过其高亲和力FCE受体I（FCERI）结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞的表面。通过特定过敏原通过表面IgE进行交联可引起细胞的脱粒以及炎症介质的释放。这一过程多了几分钟，导致AR和哮喘的典型眼，鼻和肺症状，例如瘙痒，眼睛变红，流鼻涕和/或拥挤的鼻子以及由于下空气道的障碍而导致空气诱捕引起的喘息。一些患者也可能发展后期反应（LPR）。这些反应通常在过敏原暴露后2-6小时发展，强度在6-9小时之间达到峰值，并且主要具有组织水肿的特征，这表现为气流阻塞。

自从引入易于使用和高度吸收性的粘膜液采样设备以来，参与直接和晚期过敏反应的介体和释放的动力学在过去几年中已经得到了很好的特征。伦敦帝国学院的努力以及维也纳调查人员小组未发表的数据表明，参与直接阶段的主要调解人包括肥大细胞衍生的介质（胰酶，PGD2），上皮警报器（IL-33，SST2）和补充（C3A） ，C4A，C5A，D-Dimer）。参与后期反应的介质还包括警报蛋白（SST2，TSLP），Th2细胞因子（IL-4，IL-5，IL-13），中性粒细胞介质（MMP-9）和嗜酸性粒细胞介质（EDN）。

然而，最近通过安慰剂对照研究也清楚的是，一些介体是机械介导的（未发表的观察结果），由于采样过程本身而被释放到细胞外环境中。这是至关重要的，因为了解哪种细胞因子是机械的，哪些是过敏原特异性的，将有助于指导未来的研究，试图针对特定的生物标志物进行治疗或疾病监测。为了了解机械释放在对过敏原反应中是否起任何作用，需要研究不同的患者队列，以查看其反应是否在任何方面有所不同。

理性

鉴于此，研究人员提出了一项研究，以研究粘膜采样对鼻上皮细胞因子释放的影响。研究人员计划采样不同的患者队列（过敏性鼻炎，过敏性哮喘，非过敏性），以了解机械效应如何受到采样以及过敏或非过敏状态的影响。通过在每个组中包括10名患者，研究人员希望在每个研究组中建立一系列“正常”，以机械释放相关的细胞因子，这将有助于为未来研究过敏原反应的研究提供信息。为了绘制对气道采样的症状和客观响应，将采用症状分数和气道流量计。为了绘制响应的动力学，参与者将在一天的8小时内进行粘膜抽样时间课程。由于没有给出介入的物质，这项研究将对所涉及的个人承担非常低的风险，同时对机械操作的上皮反应进行重要的启示。

在这项单中心，试点研究中，将自愿招募总共36名患者（每组n = 12例），并将全部接受鼻抽样。研究参与者将在一次访问中进行鼻抽样。

筛选

程序：

• 签署知情同意书
• 筛选编号的分配
• 人口统计数据
• 过敏史
• 评估和排除标准
• 如果需要SPT，女性的妊娠试验
• 病史
• 报告哮喘病史的患者必须提供气道阻塞和可逆性的客观证据（肺活量测定法或PC20甲基酚/组胺<8mg）
• 伴随的药物
• 前鼻镜
• 标准SPT，带有商业提取物，来自：Hazel，Ash，Grass Mix，Ragweed，Mugwort，D。Pteronyssinus，D。Farina，Cat和Dog Dander，替代品，cladosporium，组胺和阴性对照
• 血液采样（最大60毫升的肝素化血液和血清） - 一部分血液样本将直接发送给实验室以分析总IgE，并针对相关的过敏原。从其余的血液中，将准备RNA并存储在-80°C下，血清将分离并存储在-20°C下。
• 鼻抽样（粘膜凝结采样和鼻分泌抽样）

抽样访问

程序：

• 重新评估IN和排除标准（过敏原特异性IGE结果）
• 记录伴随药物
• 基线血液采样
• 两个鼻孔的基线鼻鼻样品（鼻分泌抽样）在0min
• 基线TNSS得分
• 基线PNIF
• 不良事件（AE）记录

• Blood, PNIF, nasal sampling (both nostrils: mucosal curette sampling and nasal secretion sampling), and TNSS score, 15min, 30min, 45min, 60min, 75min, 90min, 120min, 180min, 240min, 300min, 360min, 420min, 480min after onset抽样时间

  4研究程序

4.1参与者的病史，人口统计数据，随之而来的药物将被要求参与者进行病史，包括人口统计数据和伴随药物，其过敏症状，包括强度和持续时间及其过敏性药物病史。

4.2过敏和TNSS得分的历史将要求参与者出现打喷嚏，犀牛，鼻瘙痒，鼻腔充血，并分级每个症状。他们将使用以下症状分数方法：0 =不存在； 1 =温和 - 存在但容易容忍； 2 =中度 - 症状令人困扰，但不会干扰日常生活活动； 3 =严重 - 症状很难忍受，并且正在干扰日常生活活动。

4.3前鼻镜前鼻镜将在筛查访问期间进行一次，以排除解剖方差（例如，间隔偏差）或病理变化（例如鼻息）。它将通过使用镜子坐在头部稍微向后的患者进行窥镜来执行。

4.4峰值吸气鼻流量计（PNIF）PNIF的便携性和易于性提供了获得客观测量的独特机会。最近在鼻腔过敏原挑战期间，它也已被确认为研究工具。

4.4.1步骤：PNIF使用可变的直径管，直接以每分钟校准，以及低惯性指示环。灵感操纵后的环位置表明达到的最大流量。当患者通过嘴或鼻子吸入患者时，该设备可以使空气通过仪表绘制，并且光标沿尺度移动以表示吸入速度。可以通过检查光标的位置在校准刻度的位置来指出达到的流量。

4.4.2 PNIF在研究行为中：将在研究当天对参与者进行培训如何使用PNIF，然后将其在所有研究时间点使用以获取有关鼻流的信息。

4.5皮肤刺测试4.5.1步骤：通过在每个施用点之间至少在每个施用点之间的无菌柳叶刀，在含无菌柳叶刀的含无菌柳叶核的液滴（20英尺）中轻轻刺穿皮肤，将过敏原插入前臂真皮。 0.9％氯化钠溶液将用作阴性和组胺作为阳性对照。在先前敏感的个体中，在挑战各自的过敏原时，会在15分钟内发生发痒的肿胀和皮肤变红（鲸鱼和耀斑反应）。 20分钟后，将擦掉过敏原溶液，并将用圆头笔来追溯到Wheals的边缘。透明的胶带将在皮肤上粘合，以便将鲸鱼的轮廓转移到胶带上以获取记录。 Wheal的表面将通过数字平面法计算。为了包含，直径至少3毫米的盐将被视为阳性反应。

4.5.2测试解决方案：将在筛查访问中使用市售的树木和草花粉，杂草和多年生过敏原（Allergopharma，维也纳，奥地利），并将根据制造商的说明来存储。作为对照，将使用无菌0.9％NaCl溶液（阴性对照）和组胺（阳性对照，过敏症，维也纳，奥地利）。它们将根据制造商的说明进行存储。

4.5.3研究行为中的SPT：

筛查访问：

标准的皮肤刺测测试，包括商业桦木花粉提取物以及一系列树木和草花粉，杂草和多年生过敏原（所有过敏剂，维也纳，奥地利，奥地利），将在ENT部门的过敏诊所进行常规诊断中使用，以评估参与者在筛查访问中的敏感性概况。

4.5.4安全预防措施作为安全预防措施，在测试后将监视参与者30分钟。所有调查都将在启动部门的门诊诊所进行，那里有完整的紧急设备。

4.6免疫学参数的血液采样和测量将在筛查访问时进行血液样本，并在所有研究访问中通过穿刺皮肤测试前的前肌静脉。每次访问最多将进行肝素化（例如，用于嗜碱性敏感性测定）或制备血清（例如评估总和过敏原特异性免疫球蛋白水平或RBL分析）。血清小瓶将进行处理，血清将存储在-20°C下。 Cap-Feia将测量筛查访问的血液样本的过敏原特异性IgE，以评估过敏原特异性RAST类。将通过微阵列测量或ELISA对总，自由和过敏原特异性血清IgE，IgG，IgA和IgM进行​​测量。免疫介质将使用我们或我们在英国剑桥阿斯利康的合作者使用MSD平台来衡量。该测量将在研究结束时在所有收集的血清样品中进行，以最大程度地减少指体变异。

4.7女性参与者的妊娠试验，通过标准尿液妊娠试验将排除妊娠。该测试将在筛查访问中的第一次皮肤刺测之前进行，然后每月一次。

4.8鼻标本收集鼻标本收集将在所有访问中进行。对于每个访问标本，都将使用鼻吸附FXI/PU（包含合成吸收性矩阵（SAM））或10厘米长的塑料库莱（来自英国Hunt Developments，UK）（来自美国Arlington Scientific，USA）

4.8.1使用FXI/PU（英国Hunt Developments）使用鼻吸附。在可视化下，该设备将插入鼻腔中，并沿着侧壁朝向下涡轮机放置。患者的食指将用于压在Alar和外侧鼻软骨的外部方面，以将设备固定在适当的位置。 1分钟后，将卸下设备，然后在-80°C下冷冻。

4.8.2粘膜mRNA采样10厘米的鼻螺旋体（Rhino-Probe，Arlington Scientific，USA，美国或Cellskim，Hunt Developments，UK）。在直接可视化下，将使螺旋螺丝夹在下部涡轮底部的中部部分。将螺旋压在粘膜表面向外移动2-3次。该运动将重复2-3次，以确保良好的样本收集。这种凝乳和技术已被证明不会给参与者带来明显的不适，因此它具有不需要局部麻醉的优势。在收集细胞将在QIAGEN RLT缓冲液中裂解并储存在-80°C下，以进行以后的mRNA分析。

5研究产品和研究药物5.3伴随药物5.3.1通常，受试者进入研究或研究期间的任何时间都将所有其他药物视为伴随药物，并将记录在CRF中。在研究期间，应将药物保持在最低限度，但是如果不干扰研究方案，则可能会提供必要的药物。

5.3.2救援药物尽管过敏事件在这项研究中不太可能被认为是可能的。因此，如果SPT发生过敏反应，将立即提供完整的紧急套件。此外，如果参与者在SPT Desloratadin 5mg之后患有强烈的皮肤症状，以减轻症状。

5.3.3禁止伴随药物

在研究期间，受试者必须保持干扰研究程序的药物。在本研究中不允许以下伴随治疗：

• 系统性或局部皮质类固醇
• 其他免疫抑制药物
• 筛查前3天，抗组胺药或dis钠降解
• 全身或鼻内肾上腺素药物
• 心理药物药物

• ACE抑制剂或β受体阻滞剂

  6不良事件发生不利事件是临床研究期间的任何事件，包括际交流疾病或事故，会损害受试者的福祉；它也可能采用异常实验室价值的形式。一词不良事件并不意味着与研究治疗的因果关系。

所有经历不良事件的受试者（无论是否考虑与研究治疗的使用相关）都将受到监控，直到症状消退和任何异常的实验室价值都恢复为基线，或者直到对观察到的变化有令人满意的解释，或直到死亡为止。 ，在这种情况下，将提供合格病理学家的完整病理报告。所有调查结果必须在案例记录表格中的“不利事件”页面上报告。

如下所述，所有不良事件将报告和记录。不良事件分为“严重”和“非严重”的类别。这确定了必须用于报告/记录不良事件的过程（请参见下文）。

6.1严重和非严重不利事件的定义

严重的不利事件是：

• 任何致命或威胁生命的事件
• 永久禁用的任何活动
• 任何需要或延长住院或延长住院的活动
• 任何涉及癌症，先天性异常或由于过量发生的事件（应用超过规定的剂量）。

不属于这些类别的不良事件被定义为无人认真的事件。

6.2评估AE的严重程度

无论将不良事件分类为严重或非严重的事件（见上文），仅根据医疗标准，其严重性必须被评估为轻度，中度或严重性：

温和=不会干扰常规活动，可接受的中等=干扰常规活动严重=不可能执行常规活动，医生认为是不可接受的，需要治疗，需要停止研究或具有残留效应。

应当指出的是，严重的不良事件本质上不必严重。无论严重程度如何，所有严重的不良事件都必须如下报告。

6.3不利事件的报告/文档不良事件通过自发报告收集。 6.3.1严重不良事件的报告/记录本研究中发生的所有严重不良事件是否认为与研究相关，必须在案例记录表格中记录在“不良事件”页面上。

必须准备并收集一份后续报告，其中包括在严重事件上获得的所有新信息。

调查人员将根据所有这些报告的要求提交伦理委员会。在必要时，调查人员将通知当局。

6.3.2非严重不利事件的报告/文档，这些内容应在案例记录表格中的“不利事件”页面上进行记录。

7统计分析这些分析将寻求探索健康个体，特应个体和哮喘患者之间纵向鼻细胞因子轨迹的统计学上显着差异。我们将首先进行基本描述性统计。主题特征（例如健康状况，人口统计学变量）和结果变量（例如鼻细胞因子释放，临床反应），可以通过计算最大，最小，中值，平均值，平均值和标准偏差的度量变量以及每个分类变量的绝对频率和相对频率主题群体（健康个体，特征性个体和哮喘患者）。

基线之间的对数变更将在组之间进行比较，并且在每个时间点使用t检验进行每次成对比较的t检验，以探索跨时间的形状。对于图形说明，将绘制每个患者的单个对数 - 基线变换 - 对象以及95％CI的组平均值。

如果对数从基线 - 验证的对数变化具有合理的线性，我们将使用与主体特定的随机截距的混合线性模型来测试受试者组和纵向轨迹之间的关联，以考虑重复度量的个体内相关性，并通过组对组进行了分析，并通过组内的重复度量相关性，并按时间交流术语测试轨迹上统计学上显着差异。这种混合建模方法的动机将是增加逐一的信息 - 概括性多点。混合建模工作推断出的平均轨迹和95％CI也将绘制

8道德和法律方面该研究将根据当地法律要求和GCP进行。它将根据《赫尔辛基宣言》（1964年）的准则，包括当前的修订。

8.1在接受该研究的接受之前，对受试者的知情同意，该受试者必须同意参加临床研究的性质，范围和可能的后果，以对他/她理解的形式进行了解释。该主题必须以书面形式同意。调查员的签名将确认受试者的同意。患者可以随时撤回同意，即使没有发表评论，也可以对他的未来医疗保健造成负面影响。鼻吸附和/或RNA和/或血液样本可以以匿名形式发送给奥地利以外的合作伙伴进行分析（例如，英国剑桥的Astrazeneca对Astrazeneca进行了切割和整个IL-33的分析）。以知情同意书的形式告知患者。

8.2在研究开始之前对研究的确认/批准，研究方案将提交维也纳医科大学伦理委员会和维也纳综合医院（Borschkegasse 8b/e 06，106，1090 Vienna，奥地利，奥地利）。

8.3保险所有参加这项研究的受试者将在苏黎世保险公司（Zürich-versicherungs-aktiengesellschaft，Schwarzenbergplatz 15，1010 Vienna，Tel. +43 50 1255 1255）中保险。

8.4机密性所有受试者的名称都将在调查人员文件中保密。在研究期间分配给他们的数量，将在整个文档和评估中确定受试者。这些受试者将被告知所有研究结果都将以最严格的信心存储和处理。

9研究结果的文档和使用9.1研究结果文档研究结果中收集的所有结果都将在源数据文件中收集，然后将其转移到案例报告表（CRF）中。案例记录表格上的所有条目将以黑色或蓝色的墨水清晰清晰。如果对案例记录形式中的条目进行了更正，则将响起单词或数字，并通过它们绘制单程。正确的值将在旧的条目和日期旁边输入，并且将初始化更正。不正确的条目不得以任何方式校正流体或毁灭或难以辨认。完成的CRF将由调查员签署。最终考试后，CRF将立即完成。 CRF所基于的医疗记录将至少保存15年。

9.2研究结果的使用本研究结果将由研究人员在科学期刊上发表，并在科学会议上发表。在提交之前，手稿将分发给所有共同投资者。

关于研究参与者的潜在风险和利益的10个考虑和剂量的选择

随附的参与者不会直接从研究中受益。然而，由于机械粘膜刺激的动力学仍未完全了解，这项全面的试点研究将为指导未来的研究提供机会，这将有望导致发现新颖的治疗靶标。

参与者的潜在风险包括抽血部位的疼痛，感染和血肿。在鼻粘膜和分泌物采样光鼻出血是可能的风险。在SPT期间，尽管极不可能，但过敏反应是可能的。为了最大程度地减少过敏反应的风险，并提供最佳治疗，以防应发生过敏反应，将在SPT后至少监测患者30分钟。在所有参与者访问中，受过培训的人员和紧急药物将一直提供。

• 由于草花粉引起的过敏性鼻炎
• 过敏性哮喘

• 安慰剂比较器：非过敏患者
  干预：其他：鼻分泌抽样
• 主动比较器：过敏性哮喘患者
  对草花粉过敏
  干预：其他：鼻分泌抽样
• 主动比较者：过敏性鼻炎患者
  对草花粉过敏
  干预：其他：鼻分泌抽样

• 温伯格，例如。 WAO白皮书2011-2012。 Curr Allergy Clin IM。 2011; 24（3）：156-7。
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纳入标准：

所有小组

• 男性或女性
• 18至50岁
• 愿意遵守研究方案和书面知情同意书
• 受试者必须有标准的医疗保险
• 在研究期间必须提供受试者才能完成所有治疗和评估

过敏性鼻炎

• 根据病史，至少两个季节对草花粉的中度至重度过敏性鼻炎至少两个季节
• 皮肤刺测试呈阳性对草花粉提取物
• 血液免疫对草花粉的敏感性（> 0.35 kU/l草花粉提取物特异性IgE或更高的IGE，如Unicap-Feia所确定）
• 没有哮喘的史

过敏性哮喘

• 哮喘的临床史
• 肺活量计可逆性或PC20甲基苯胺/组胺<8mg
• 皮肤刺测试阳性对草提取物
• 血液免疫对草花粉的敏感性（> 0.35 kU/l草花粉提取物特异性IgE或更高的IGE，如Unicap-Feia所确定）

非过敏药

• 没有哮喘的史
• 没有过敏的史
• 负面皮肤刺测试到普通的皮肤刺测试面板，包括草花粉
• 对草花粉没有免疫敏化（<0.35 kU/l草花粉提取物特异性IgE或更高的IGE，如Unicap-Feia所确定）

排除标准：

• 超过50岁以上的18岁
• 活跃的吸烟者
• 过敏反应的历史
• 任何严重的慢性，恶性或普通疾病
• 在研究开始之前的前两个月内，用全身或局部性（鼻内，吸入，外部）皮质类固醇治疗
• 在筛查访问前3天用抗组胺药治疗
• 在研究开始之前的前6个月内，用其他免疫抑制剂治疗
• 动脉高血压或抗高血压疗法的使用，包括β受体阻滞剂
• 皮肤刺测试的障碍，例如：测试区域的皮肤炎症，荨麻疹事实
• 怀孕，哺乳或性活跃的具有生育潜力的女性，她们不使用医学上接受的避孕方法
• 一种精神状况，使受试者无法理解研究的性质，范围和可能的后果和/或证据不合作的证据
• 在研究前一个月内参加另一项临床试验；但是，上个月的参与仅以献血的形式和/或不接受其他干预措施。
• 已知的酒精或吸毒或滥用
• 不遵守研究程序的风险
• 先前用草花粉的免疫疗法
• 鼻息肉，慢性鼻窦炎的病史或鼻中隔的实质性偏差

• 由于反复的鼻抽样而导致鼻气流的变化[时间范围：1年]
  经过验证的峰值鼻吸气流量计（PNIF）将用于测量鼻粘膜采样后鼻流的变化。
• 使用经过验证的鼻症状评分系统的鼻症状变化[时间范围：1年]
  为了测量鼻粘膜采样后鼻症状的主观变化，将使用包含四个参数的总鼻症状评分（TNSS）；鼻瘙痒，鼻阻塞，打喷嚏和流鼻涕。每个参数从0-3评分，得分较高，表明鼻腔症状负担更高。然后将每个参数的分数添加在一起，以给出最大分数为12的TNSS，最低分数为0。
• 定义基线和采样后细胞因子鼻mRNA水平的差异[时间范围：1年]
  使用经过验证的隆尼诺探针装置将获得鼻组织样品。然后将组织样品处理为RNA，以测量鼻腔抽样前后细胞因子mRNA水平的任何变化，以寻找基因表达的变化

• 由于反复的鼻抽样而导致鼻气流的变化[时间范围：1年]
  经过验证的峰值鼻吸气流量计（PNIF）将用于测量鼻粘膜采样后鼻流的变化。
• 使用经过验证的鼻症状评分系统的鼻症状变化[时间范围：1年]
  为了测量鼻粘膜采样后鼻症状的主观变化，将使用包含四个参数的总鼻症状评分（TNSS）；鼻瘙痒，鼻阻塞，打喷嚏和流鼻涕。
• 定义基线和采样后细胞因子鼻mRNA水平的差异[时间范围：1年]
  使用经过验证的隆尼诺探针装置将获得鼻组织样品。然后将组织样品处理为RNA，以测量鼻腔抽样前后细胞因子mRNA水平的任何变化，以寻找基因表达的变化

过敏性鼻炎（AR）和过敏性哮喘是I型过敏的常见表现，一种IgE介导的超敏反应疾病估计影响了全球人群的40％。 IgE由B细胞产生，并通过其高亲和力FCE受体I（FCERI）结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞的表面。通过特定过敏原通过表面IgE进行交联可引起细胞的脱粒以及炎症介质的释放。这一过程多了几分钟，导致AR和哮喘的典型眼，鼻和肺症状，例如瘙痒，眼睛变红，流鼻涕和/或拥挤的鼻子以及由于下空气道的障碍而导致空气诱捕引起的喘息。一些患者也可能发展后期反应（LPR）。这些反应通常在过敏原暴露后2-6小时发展，强度在6-9小时之间达到峰值，并且主要具有组织水肿的特征，这表现为气流阻塞。

自从引入易于使用和高度吸收性的粘膜液采样设备以来，参与直接和晚期过敏反应的介体和释放的动力学在过去几年中已经得到了很好的特征。伦敦帝国学院的努力以及维也纳调查人员小组未发表的数据表明，参与直接阶段的主要调解人包括肥大细胞衍生的介质（胰酶，PGD2），上皮警报器（IL-33，SST2）和补充（C3A） ，C4A，C5A，D-Dimer）。参与后期反应的介质还包括警报蛋白（SST2，TSLP），Th2细胞因子（IL-4，IL-5，IL-13），中性粒细胞介质（MMP-9）和嗜酸性粒细胞介质（EDN）。

然而，最近通过安慰剂对照研究也清楚的是，一些介体是机械介导的（未发表的观察结果），由于采样过程本身而被释放到细胞外环境中。这是至关重要的，因为了解哪种细胞因子是机械的，哪些是过敏原特异性的，将有助于指导未来的研究，试图针对特定的生物标志物进行治疗或疾病监测。为了了解机械释放在对过敏原反应中是否起任何作用，需要研究不同的患者队列，以查看其反应是否在任何方面有所不同。

理性

鉴于此，研究人员提出了一项研究，以研究粘膜采样对鼻上皮细胞因子释放的影响。研究人员计划采样不同的患者队列（过敏性鼻炎，过敏性哮喘，非过敏性），以了解机械效应如何受到采样以及过敏或非过敏状态的影响。通过在每个组中包括10名患者，研究人员希望在每个研究组中建立一系列“正常”，以机械释放相关的细胞因子，这将有助于为未来研究过敏原反应的研究提供信息。为了绘制对气道采样的症状和客观响应，将采用症状分数和气道流量计。为了绘制响应的动力学，参与者将在一天的8小时内进行粘膜抽样时间课程。由于没有给出介入的物质，这项研究将对所涉及的个人承担非常低的风险，同时对机械操作的上皮反应进行重要的启示。

在这项单中心，试点研究中，将自愿招募总共36名患者（每组n = 12例），并将全部接受鼻抽样。研究参与者将在一次访问中进行鼻抽样。

筛选

程序：

• 签署知情同意书
• 筛选编号的分配
• 人口统计数据
• 过敏史
• 评估和排除标准
• 如果需要SPT，女性的妊娠试验
• 病史
• 报告哮喘病史的患者必须提供气道阻塞和可逆性的客观证据（肺活量测定法或PC20甲基酚/组胺<8mg）
• 伴随的药物
• 前鼻镜
• 标准SPT，带有商业提取物，来自：Hazel，Ash，Grass Mix，Ragweed，Mugwort，D。Pteronyssinus，D。Farina，Cat和Dog Dander，替代品，cladosporium，组胺和阴性对照
• 血液采样（最大60毫升的肝素化血液和血清） - 一部分血液样本将直接发送给实验室以分析总IgE，并针对相关的过敏原。从其余的血液中，将准备RNA并存储在-80°C下，血清将分离并存储在-20°C下。
• 鼻抽样（粘膜凝结采样和鼻分泌抽样）

抽样访问

程序：

• 重新评估IN和排除标准（过敏原特异性IGE结果）
• 记录伴随药物
• 基线血液采样
• 两个鼻孔的基线鼻鼻样品（鼻分泌抽样）在0min
• 基线TNSS得分
• 基线PNIF
• 不良事件（AE）记录

• Blood, PNIF, nasal sampling (both nostrils: mucosal curette sampling and nasal secretion sampling), and TNSS score, 15min, 30min, 45min, 60min, 75min, 90min, 120min, 180min, 240min, 300min, 360min, 420min, 480min after onset抽样时间

  4研究程序

4.1参与者的病史，人口统计数据，随之而来的药物将被要求参与者进行病史，包括人口统计数据和伴随药物，其过敏症状，包括强度和持续时间及其过敏性药物病史。

4.2过敏和TNSS得分的历史将要求参与者出现打喷嚏，犀牛，鼻瘙痒，鼻腔充血，并分级每个症状。他们将使用以下症状分数方法：0 =不存在； 1 =温和 - 存在但容易容忍； 2 =中度 - 症状令人困扰，但不会干扰日常生活活动； 3 =严重 - 症状很难忍受，并且正在干扰日常生活活动。

4.3前鼻镜前鼻镜将在筛查访问期间进行一次，以排除解剖方差（例如，间隔偏差）或病理变化（例如鼻息）。它将通过使用镜子坐在头部稍微向后的患者进行窥镜来执行。

4.4峰值吸气鼻流量计（PNIF）PNIF的便携性和易于性提供了获得客观测量的独特机会。最近在鼻腔过敏原挑战期间，它也已被确认为研究工具。

4.4.1步骤：PNIF使用可变的直径管，直接以每分钟校准，以及低惯性指示环。灵感操纵后的环位置表明达到的最大流量。当患者通过嘴或鼻子吸入患者时，该设备可以使空气通过仪表绘制，并且光标沿尺度移动以表示吸入速度。可以通过检查光标的位置在校准刻度的位置来指出达到的流量。

4.4.2 PNIF在研究行为中：将在研究当天对参与者进行培训如何使用PNIF，然后将其在所有研究时间点使用以获取有关鼻流的信息。

4.5皮肤刺测试4.5.1步骤：通过在每个施用点之间至少在每个施用点之间的无菌柳叶刀，在含无菌柳叶刀的含无菌柳叶核的液滴（20英尺）中轻轻刺穿皮肤，将过敏原插入前臂真皮。 0.9％氯化钠溶液将用作阴性和组胺作为阳性对照。在先前敏感的个体中，在挑战各自的过敏原时，会在15分钟内发生发痒的肿胀和皮肤变红（鲸鱼和耀斑反应）。 20分钟后，将擦掉过敏原溶液，并将用圆头笔来追溯到Wheals的边缘。透明的胶带将在皮肤上粘合，以便将鲸鱼的轮廓转移到胶带上以获取记录。 Wheal的表面将通过数字平面法计算。为了包含，直径至少3毫米的盐将被视为阳性反应。

4.5.2测试解决方案：将在筛查访问中使用市售的树木和草花粉，杂草和多年生过敏原（Allergopharma，维也纳，奥地利），并将根据制造商的说明来存储。作为对照，将使用无菌0.9％NaCl溶液（阴性对照）和组胺（阳性对照，过敏症，维也纳，奥地利）。它们将根据制造商的说明进行存储。

4.5.3研究行为中的SPT：

筛查访问：

标准的皮肤刺测测试，包括商业桦木花粉提取物以及一系列树木和草花粉，杂草和多年生过敏原（所有过敏剂，维也纳，奥地利，奥地利），将在ENT部门的过敏诊所进行常规诊断中使用，以评估参与者在筛查访问中的敏感性概况。

4.5.4安全预防措施作为安全预防措施，在测试后将监视参与者30分钟。所有调查都将在启动部门的门诊诊所进行，那里有完整的紧急设备。

4.6免疫学参数的血液采样和测量将在筛查访问时进行血液样本，并在所有研究访问中通过穿刺皮肤测试前的前肌静脉。每次访问最多将进行肝素化（例如，用于嗜碱性敏感性测定）或制备血清（例如评估总和过敏原特异性免疫球蛋白水平或RBL分析）。血清小瓶将进行处理，血清将存储在-20°C下。 Cap-Feia将测量筛查访问的血液样本的过敏原特异性IgE，以评估过敏原特异性RAST类。将通过微阵列测量或ELISA对总，自由和过敏原特异性血清IgE，IgG，IgA和IgM进行​​测量。免疫介质将使用我们或我们在英国剑桥阿斯利康的合作者使用MSD平台来衡量。该测量将在研究结束时在所有收集的血清样品中进行，以最大程度地减少指体变异。

4.7女性参与者的妊娠试验，通过标准尿液妊娠试验将排除妊娠。该测试将在筛查访问中的第一次皮肤刺测之前进行，然后每月一次。

4.8鼻标本收集鼻标本收集将在所有访问中进行。对于每个访问标本，都将使用鼻吸附FXI/PU（包含合成吸收性矩阵（SAM））或10厘米长的塑料库莱（来自英国Hunt Developments，UK）（来自美国Arlington Scientific，USA）

4.8.1使用FXI/PU（英国Hunt Developments）使用鼻吸附。在可视化下，该设备将插入鼻腔中，并沿着侧壁朝向下涡轮机放置。患者的食指将用于压在Alar和外侧鼻软骨的外部方面，以将设备固定在适当的位置。 1分钟后，将卸下设备，然后在-80°C下冷冻。

4.8.2粘膜mRNA采样10厘米的鼻螺旋体（Rhino-Probe，Arlington Scientific，USA，美国或Cellskim，Hunt Developments，UK）。在直接可视化下，将使螺旋螺丝夹在下部涡轮底部的中部部分。将螺旋压在粘膜表面向外移动2-3次。该运动将重复2-3次，以确保良好的样本收集。这种凝乳和技术已被证明不会给参与者带来明显的不适，因此它具有不需要局部麻醉的优势。在收集细胞将在QIAGEN RLT缓冲液中裂解并储存在-80°C下，以进行以后的mRNA分析。

5研究产品和研究药物5.3伴随药物5.3.1通常，受试者进入研究或研究期间的任何时间都将所有其他药物视为伴随药物，并将记录在CRF中。在研究期间，应将药物保持在最低限度，但是如果不干扰研究方案，则可能会提供必要的药物。

5.3.2救援药物尽管过敏事件在这项研究中不太可能被认为是可能的。因此，如果SPT发生过敏反应，将立即提供完整的紧急套件。此外，如果参与者在SPT Desloratadin 5mg之后患有强烈的皮肤症状，以减轻症状。

5.3.3禁止伴随药物

在研究期间，受试者必须保持干扰研究程序的药物。在本研究中不允许以下伴随治疗：

• 系统性或局部皮质类固醇
• 其他免疫抑制药物
• 筛查前3天，抗组胺药或dis钠降解
• 全身或鼻内肾上腺素药物
• 心理药物药物

• ACE抑制剂或β受体阻滞剂

  6不良事件发生不利事件是临床研究期间的任何事件，包括际交流疾病或事故，会损害受试者的福祉；它也可能采用异常实验室价值的形式。一词不良事件并不意味着与研究治疗的因果关系。

所有经历不良事件的受试者（无论是否考虑与研究治疗的使用相关）都将受到监控，直到症状消退和任何异常的实验室价值都恢复为基线，或者直到对观察到的变化有令人满意的解释，或直到死亡为止。 ，在这种情况下，将提供合格病理学家的完整病理报告。所有调查结果必须在案例记录表格中的“不利事件”页面上报告。

如下所述，所有不良事件将报告和记录。不良事件分为“严重”和“非严重”的类别。这确定了必须用于报告/记录不良事件的过程（请参见下文）。

6.1严重和非严重不利事件的定义

严重的不利事件是：

• 任何致命或威胁生命的事件
• 永久禁用的任何活动
• 任何需要或延长住院或延长住院的活动
• 任何涉及癌症，先天性异常或由于过量发生的事件（应用超过规定的剂量）。

不属于这些类别的不良事件被定义为无人认真的事件。

6.2评估AE的严重程度

无论将不良事件分类为严重或非严重的事件（见上文），仅根据医疗标准，其严重性必须被评估为轻度，中度或严重性：

温和=不会干扰常规活动，可接受的中等=干扰常规活动严重=不可能执行常规活动，医生认为是不可接受的，需要治疗，需要停止研究或具有残留效应。

应当指出的是，严重的不良事件本质上不必严重。无论严重程度如何，所有严重的不良事件都必须如下报告。

6.3不利事件的报告/文档不良事件通过自发报告收集。 6.3.1严重不良事件的报告/记录本研究中发生的所有严重不良事件是否认为与研究相关，必须在案例记录表格中记录在“不良事件”页面上。

必须准备并收集一份后续报告，其中包括在严重事件上获得的所有新信息。

调查人员将根据所有这些报告的要求提交伦理委员会。在必要时，调查人员将通知当局。

6.3.2非严重不利事件的报告/文档，这些内容应在案例记录表格中的“不利事件”页面上进行记录。

7统计分析这些分析将寻求探索健康个体，特应个体和哮喘患者之间纵向鼻细胞因子轨迹的统计学上显着差异。我们将首先进行基本描述性统计。主题特征（例如健康状况，人口统计学变量）和结果变量（例如鼻细胞因子释放，临床反应），可以通过计算最大，最小，中值，平均值，平均值和标准偏差的度量变量以及每个分类变量的绝对频率和相对频率主题群体（健康个体，特征性个体和哮喘患者）。

基线之间的对数变更将在组之间进行比较，并且在每个时间点使用t检验进行每次成对比较的t检验，以探索跨时间的形状。对于图形说明，将绘制每个患者的单个对数 - 基线变换 - 对象以及95％CI的组平均值。

如果对数从基线 - 验证的对数变化具有合理的线性，我们将使用与主体特定的随机截距的混合线性模型来测试受试者组和纵向轨迹之间的关联，以考虑重复度量的个体内相关性，并通过组对组进行了分析，并通过组内的重复度量相关性，并按时间交流术语测试轨迹上统计学上显着差异。这种混合建模方法的动机将是增加逐一的信息 - 概括性多点。混合建模工作推断出的平均轨迹和95％CI也将绘制

8道德和法律方面该研究将根据当地法律要求和GCP进行。它将根据《赫尔辛基宣言》（1964年）的准则，包括当前的修订。

8.1在接受该研究的接受之前，对受试者的知情同意，该受试者必须同意参加临床研究的性质，范围和可能的后果，以对他/她理解的形式进行了解释。该主题必须以书面形式同意。调查员的签名将确认受试者的同意。患者可以随时撤回同意，即使没有发表评论，也可以对他的未来医疗保健造成负面影响。鼻吸附和/或RNA和/或血液样本可以以匿名形式发送给奥地利以外的合作伙伴进行分析（例如，英国剑桥的Astrazeneca对Astrazeneca进行了切割和整个IL-33的分析）。以知情同意书的形式告知患者。

8.2在研究开始之前对研究的确认/批准，研究方案将提交维也纳医科大学伦理委员会和维也纳综合医院（Borschkegasse 8b/e 06，106，1090 Vienna，奥地利，奥地利）。

8.3保险所有参加这项研究的受试者将在苏黎世保险公司（Zürich-versicherungs-aktiengesellschaft，Schwarzenbergplatz 15，1010 Vienna，Tel. +43 50 1255 1255）中保险。

8.4机密性所有受试者的名称都将在调查人员文件中保密。在研究期间分配给他们的数量，将在整个文档和评估中确定受试者。这些受试者将被告知所有研究结果都将以最严格的信心存储和处理。

9研究结果的文档和使用9.1研究结果文档研究结果中收集的所有结果都将在源数据文件中收集，然后将其转移到案例报告表（CRF）中。案例记录表格上的所有条目将以黑色或蓝色的墨水清晰清晰。如果对案例记录形式中的条目进行了更正，则将响起单词或数字，并通过它们绘制单程。正确的值将在旧的条目和日期旁边输入，并且将初始化更正。不正确的条目不得以任何方式校正流体或毁灭或难以辨认。完成的CRF将由调查员签署。最终考试后，CRF将立即完成。 CRF所基于的医疗记录将至少保存15年。

9.2研究结果的使用本研究结果将由研究人员在科学期刊上发表，并在科学会议上发表。在提交之前，手稿将分发给所有共同投资者。

关于研究参与者的潜在风险和利益的10个考虑和剂量的选择

随附的参与者不会直接从研究中受益。然而，由于机械粘膜刺激的动力学仍未完全了解，这项全面的试点研究将为指导未来的研究提供机会，这将有望导致发现新颖的治疗靶标。

参与者的潜在风险包括抽血部位的疼痛，感染和血肿。在鼻粘膜和分泌物采样光鼻出血是可能的风险。在SPT期间，尽管极不可能，但过敏反应是可能的。为了最大程度地减少过敏反应的风险，并提供最佳治疗，以防应发生过敏反应，将在SPT后至少监测患者30分钟。在所有参与者访问中，受过培训的人员和紧急药物将一直提供。

• 由于草花粉引起的过敏性鼻炎
• 过敏性哮喘

• 安慰剂比较器：非过敏患者
  干预：其他：鼻分泌抽样
• 主动比较器：过敏性哮喘患者
  对草花粉过敏
  干预：其他：鼻分泌抽样
• 主动比较者：过敏性鼻炎患者
  对草花粉过敏
  干预：其他：鼻分泌抽样

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纳入标准：

所有小组

• 男性或女性
• 18至50岁
• 愿意遵守研究方案和书面知情同意书
• 受试者必须有标准的医疗保险
• 在研究期间必须提供受试者才能完成所有治疗和评估

过敏性鼻炎

• 根据病史，至少两个季节对草花粉的中度至重度过敏性鼻炎至少两个季节
• 皮肤刺测试呈阳性对草花粉提取物
• 血液免疫对草花粉的敏感性（> 0.35 kU/l草花粉提取物特异性IgE或更高的IGE，如Unicap-Feia所确定）
• 没有哮喘的史

过敏性哮喘

• 哮喘的临床史
• 肺活量计可逆性或PC20甲基苯胺/组胺<8mg
• 皮肤刺测试阳性对草提取物
• 血液免疫对草花粉的敏感性（> 0.35 kU/l草花粉提取物特异性IgE或更高的IGE，如Unicap-Feia所确定）

非过敏药

• 没有哮喘的史
• 没有过敏的史
• 负面皮肤刺测试到普通的皮肤刺测试面板，包括草花粉
• 对草花粉没有免疫敏化（<0.35 kU/l草花粉提取物特异性IgE或更高的IGE，如Unicap-Feia所确定）

排除标准：

• 超过50岁以上的18岁
• 活跃的吸烟者
• 过敏反应的历史
• 任何严重的慢性，恶性或普通疾病
• 在研究开始之前的前两个月内，用全身或局部性（鼻内，吸入，外部）皮质类固醇治疗
• 在筛查访问前3天用抗组胺药治疗
• 在研究开始之前的前6个月内，用其他免疫抑制剂治疗
• 动脉高血压或抗高血压疗法的使用，包括β受体阻滞剂
• 皮肤刺测试的障碍，例如：测试区域的皮肤炎症，荨麻疹事实
• 怀孕，哺乳或性活跃的具有生育潜力的女性，她们不使用医学上接受的避孕方法
• 一种精神状况，使受试者无法理解研究的性质，范围和可能的后果和/或证据不合作的证据
• 在研究前一个月内参加另一项临床试验；但是，上个月的参与仅以献血的形式和/或不接受其他干预措施。
• 已知的酒精或吸毒或滥用
• 不遵守研究程序的风险
• 先前用草花粉的免疫疗法
• 鼻息肉，慢性鼻窦炎的病史或鼻中隔的实质性偏差