• 由SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例存在于ICI治疗的St.IV NSCLC患者的肿瘤样本中，或者无法达到客观反应或无法达到客观响应[时间范围：从包含日期到完成的日期完成，平均为2年。这是给予的
  通过识别和统计比较反应与非反应患者的肿瘤中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）i）了解哪些免疫过程对ICI的反应或耐药性ii ii ii）识别出推定的分子生物标志物III III ）确定推定的治疗靶标
• 由SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例存在于ICI治疗的St.IV NSCLC患者的外周血中，在ICI周期1周期之前和之后获得客观反应或未达到客观反应完成，平均2年。这是给予的
  通过识别和统计比较反应与非反应患者的外周血中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）了解哪些免疫过程对ICI的反应或抗性ii ii ii ii）识别出假定的分子生物标志物III）识别假定的疗法疗法目标

• 由ICI诱导的肺炎BAL液[时间范围：从包含日期到完成研究完成的SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例，平均为2年。这是给予的
  通过识别和统计比较ICI-/RT-/TKI诱导的肺炎BAL液中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）了解哪些免疫过程驱动这些不良事件ii ii ii）识别出假定的分子生物标志物III）识别假定的疗法疗法目标
• 由SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例存在于ICI诱导的肺炎外周血单核细胞[时间范围：从包含日期到研究完成日期，平均为2年。这是给予的
  通过识别和统计比较ICI-/RT-/TKI诱导的肺炎外周血单核细胞中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）了解哪些免疫过程驱动这些不良事件ii ii）ii）识别出假定的分子生物标志物III III）iii iii iii）识别推定的治疗靶标

这项前瞻性非干预探索性研究的主要目的是在单细胞分辨率中（免疫检查点封闭点暴露之前）表征晚期NSCLC的肿瘤微环境，并将发现与临床结果相关联。这种方法将允许关于ICI和（主要）抗性机制的作用机理产生新的假设。长期的目标是，这些新型的机械洞察力将转化为临床环境，以开发出更好的ICI功效生物标志物。重要的是，由于研究人员还将顺序介绍外周血的免疫组成，因此该研究提供了开发循环（非侵入性）生物标志物的机会。

第二个目的是表征这些ICI治疗的癌症患者的支气管肺泡灌洗（BAL）液的免疫细胞组成，如果他们患有ICI-肺炎。这些机械洞察力可以直接导致推定的诊断生物标志物和治疗靶标。由于还将进行血液样本的单细胞分析，因此也可以鉴定出ICI毒性的循环生物标志物，从而使非侵入性诊断可行。

在使用免疫检查点抑制剂开始治疗之前，研究人员将从70名St.IV NSCLC患者中收集肿瘤活检。这些活检是在医学要求的常规程序中进行诊断目的的，并将遵循以下实验程序：

首先，将在多达5,000个随机解离的细胞上应用SCRNA-SEQ和TCR-SEQ。另外，细胞表面蛋白表达可以与转录信息集成。包括Seurat在内的各种生物信息学管道将用于识别不同的细胞簇，通过标记基因表达将分配给已知的细胞类型，细胞亚型或表型。例如，这将使研究人员能够监测PD-1/PD-L1表达T细胞的丰度，细胞毒性T细胞，免疫抑制性髓样细胞等。 - 缩减）：

• 已建立的免疫细胞类型（例如T细胞（CD4+，CD8+和调节子集），NK细胞，B细胞，MDSC，巨噬细胞，巨噬细胞，嗜中性粒细胞，树突状细胞）的组成和相对丰度。将分析这些免疫细胞亚型的每一个的转录组数据，从而表征定义特定表型态的特定基因表达程序。
• 通过单细胞转录组学鉴定的所有基质细胞亚型的组成，包括成纤维细胞和内皮细胞。
• 将建立每种细胞类型和细胞亚型（或细胞状态）的基因调节网络，并将确定主转录调节剂。单个T细胞和T细胞子簇将根据干扰素激活，高增殖和转录速率以及增加的颗粒表达进行分类，这都表明T细胞激活。由于高CD8+ T细胞活性与高免疫检查点的表达相关，因此T细胞活性（基于颗粒酶表达）将与这些细胞中其他基因的表达相关，以鉴定共同调节的受体，这可能代表了新的检查点分子。

血液样本将受到类似的实验程序。首先，使用Ficoll密度梯度离心分离PBMC。单细胞转录组分析与Cite-Seq结合使用，将在5000 PBMC上进行。细胞组成将使用与处理肿瘤活检相同的生物信息学管道来确定。

作为第二个目标，将使用先前概述的SCRNA-SEQ，SCTCR-SEQ和CITE-SEQ进行ICI-Pneumonis炎和PBMC细胞组成的免疫分析。

• 肺部疾病，间隙
• NSCLC
• 免疫疗法

• 药物：免疫检查点抑制剂
  St.IV NSCLC的护理标准治疗（无驱动器突变，PD-L1> 50％）
  其他名称：Pembrolizumab
• 药物：化学疗法 +免疫检查点抑制剂
  St.IV NSCLC的护理标准治疗（无驱动器突变，PD-L1 <50％）
  其他名称：Pembrolizumab

• NSCLC St.IV（PD-L1> 50％）
  抗PD-1单一疗法
  干预：药物：免疫检查点抑制剂
• NSCLC St.IV（PD-L1 <50％）
  抗PD-1 +化学疗法组合
  干预：药物：化学疗法 +免疫检查点抑制剂

纳入标准：

• 成人M/F/X（> = 18年）
• 在组织学和临床上确认非小细胞肺癌的诊断（根据胸腔肿瘤学V7的IASLC分期手册）
• 根据指南接受一线治疗的患者
• 未包括其他临床试验
• 签署的知情同意书

排除标准：

•收集的材料在本研究中不适合进一步处理（例如质量不佳）。该决定将与实验室技术员和/或生物形式的人协商，专门从事单细胞分析。

• 由SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例存在于ICI治疗的St.IV NSCLC患者的肿瘤样本中，或者无法达到客观反应或无法达到客观响应[时间范围：从包含日期到完成的日期完成，平均为2年。这是给予的
  通过识别和统计比较反应与非反应患者的肿瘤中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）i）了解哪些免疫过程对ICI的反应或耐药性ii ii ii）识别出推定的分子生物标志物III III ）确定推定的治疗靶标
• 由SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例存在于ICI治疗的St.IV NSCLC患者的外周血中，在ICI周期1周期之前和之后获得客观反应或未达到客观反应完成，平均2年。这是给予的
  通过识别和统计比较反应与非反应患者的外周血中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）了解哪些免疫过程对ICI的反应或抗性ii ii ii ii）识别出假定的分子生物标志物III）识别假定的疗法疗法目标

• 由ICI诱导的肺炎BAL液[时间范围：从包含日期到完成研究完成的SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例，平均为2年。这是给予的
  通过识别和统计比较ICI-/RT-/TKI诱导的肺炎BAL液中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）了解哪些免疫过程驱动这些不良事件ii ii ii）识别出假定的分子生物标志物III）识别假定的疗法疗法目标
• 由SCRNA-SEQ确定的免疫细胞比例存在于ICI诱导的肺炎外周血单核细胞[时间范围：从包含日期到研究完成日期，平均为2年。这是给予的
  通过识别和统计比较ICI-/RT-/TKI诱导的肺炎外周血单核细胞中存在的免疫细胞亚型的百分比，我们的目标是i）了解哪些免疫过程驱动这些不良事件ii ii）ii）识别出假定的分子生物标志物III III）iii iii iii）识别推定的治疗靶标

这项前瞻性非干预探索性研究的主要目的是在单细胞分辨率中（免疫检查点封闭点暴露之前）表征晚期NSCLC的肿瘤微环境，并将发现与临床结果相关联。这种方法将允许关于ICI和（主要）抗性机制的作用机理产生新的假设。长期的目标是，这些新型的机械洞察力将转化为临床环境，以开发出更好的ICI功效生物标志物。重要的是，由于研究人员还将顺序介绍外周血的免疫组成，因此该研究提供了开发循环（非侵入性）生物标志物的机会。

第二个目的是表征这些ICI治疗的癌症患者的支气管肺泡灌洗（BAL）液的免疫细胞组成，如果他们患有ICI-肺炎。这些机械洞察力可以直接导致推定的诊断生物标志物和治疗靶标。由于还将进行血液样本的单细胞分析，因此也可以鉴定出ICI毒性的循环生物标志物，从而使非侵入性诊断可行。

在使用免疫检查点抑制剂开始治疗之前，研究人员将从70名St.IV NSCLC患者中收集肿瘤活检。这些活检是在医学要求的常规程序中进行诊断目的的，并将遵循以下实验程序：

首先，将在多达5,000个随机解离的细胞上应用SCRNA-SEQ和TCR-SEQ。另外，细胞表面蛋白表达可以与转录信息集成。包括Seurat在内的各种生物信息学管道将用于识别不同的细胞簇，通过标记基因表达将分配给已知的细胞类型，细胞亚型或表型。例如，这将使研究人员能够监测PD-1/PD-L1表达T细胞的丰度，细胞毒性T细胞，免疫抑制性髓样细胞等。 - 缩减）：

• 已建立的免疫细胞类型（例如T细胞（CD4+，CD8+和调节子集），NK细胞，B细胞，MDSC，巨噬细胞，巨噬细胞，嗜中性粒细胞，树突状细胞）的组成和相对丰度。将分析这些免疫细胞亚型的每一个的转录组数据，从而表征定义特定表型态的特定基因表达程序。
• 通过单细胞转录组学鉴定的所有基质细胞亚型的组成，包括成纤维细胞和内皮细胞。
• 将建立每种细胞类型和细胞亚型（或细胞状态）的基因调节网络，并将确定主转录调节剂。单个T细胞和T细胞子簇将根据干扰素激活，高增殖和转录速率以及增加的颗粒表达进行分类，这都表明T细胞激活。由于高CD8+ T细胞活性与高免疫检查点的表达相关，因此T细胞活性（基于颗粒酶表达）将与这些细胞中其他基因的表达相关，以鉴定共同调节的受体，这可能代表了新的检查点分子。

血液样本将受到类似的实验程序。首先，使用Ficoll密度梯度离心分离PBMC。单细胞转录组分析与Cite-Seq结合使用，将在5000 PBMC上进行。细胞组成将使用与处理肿瘤活检相同的生物信息学管道来确定。

作为第二个目标，将使用先前概述的SCRNA-SEQ，SCTCR-SEQ和CITE-SEQ进行ICI-Pneumonis炎和PBMC细胞组成的免疫分析。

• 肺部疾病，间隙
• NSCLC
• 免疫疗法

• 药物：免疫检查点抑制剂
  St.IV NSCLC的护理标准治疗（无驱动器突变，PD-L1> 50％）
  其他名称：Pembrolizumab
• 药物：化学疗法 +免疫检查点抑制剂
  St.IV NSCLC的护理标准治疗（无驱动器突变，PD-L1 <50％）
  其他名称：Pembrolizumab

• NSCLC St.IV（PD-L1> 50％）
  抗PD-1单一疗法
  干预：药物：免疫检查点抑制剂
• NSCLC St.IV（PD-L1 <50％）
  抗PD-1 +化学疗法组合
  干预：药物：化学疗法 +免疫检查点抑制剂

纳入标准：

• 成人M/F/X（> = 18年）
• 在组织学和临床上确认非小细胞肺癌的诊断（根据胸腔肿瘤学V7的IASLC分期手册）
• 根据指南接受一线治疗的患者
• 未包括其他临床试验
• 签署的知情同意书

排除标准：

•收集的材料在本研究中不适合进一步处理（例如质量不佳）。该决定将与实验室技术员和/或生物形式的人协商，专门从事单细胞分析。