• 为了评估AZD1222（Covishield）（2剂）对肝硬化患者的疗效，如与对照组相比，通过抗体滴度的患者的比例来衡量。 [时间范围：6个月]
• 评估AZD1222（Covishield）（2剂）对肝硬化患者的安全性和耐受性，如与对照组相比，通过BBV152不良事件的患者的比例来衡量。 [时间范围：6个月]

• 研究疫苗接种后免疫细胞的特征。 [时间范围：1年]
  免疫细胞介绍SARS COV2血清IgG水平，主要IFN-γELISPOT分析，CD4，CD8等。
• 研究疫苗接种后细胞因子特征的特征。 [时间范围：1年]
  细胞因子特征是IL-2，IL-17，TNF alpha，IL-6
• 随着时间的推移，对SARS-COV-2核素抗体的治疗后反应（基线为阳性治疗后基线为阳性治疗的基线为阴性）的参与者的比例随着时间的流逝。 [时间范围：1年]
• 使用CDC的标准在第二剂剂量的研究干预后15天或之后，使用SARS-COV-2 RT-PCR阳性症状疾病的第一个病例发生率。 [时间范围：1年]
• 第二剂量的研究干预后15天或更多的SARS-COV-RT-PCR阳性严重或严重症状疾病的发生率。 [时间范围：1年]
• 不良事件的发生率[时间范围：28天]
• 严重不良事件的发生率，医疗参加的不良事件以及特别感兴趣的不利事件。 [时间范围：治疗后第1天]
• 严重不良事件的发生率，医疗参加的不良事件以及特别感兴趣的不利事件。 [时间范围：治疗后第7天]
• 严重不良事件的发生率，医疗参加的不良事件以及特别感兴趣的不利事件。 [时间范围：治疗后第30天]
• 本地和系统性征集不良事件的发生率。 [时间范围：治疗后第7天]
• 确定包括突变菌株在内的新SARS-COV2感染的速率。 [时间范围：1年]
• 确定新的SARS-COV2感染的临床严重程度，包括突变菌株。 [时间范围：1年]
  临床严重程度取决于肺炎的新发作，呼吸衰竭和住院需求

• 研究人群：第1组：肝肝硬化第2组：对照组（健康对照）
• 研究设计：III期，单中心，介入研究
• 研究期：1年，入学期：2021年3月至2021年8月
• 有理由的样本量：

考虑到肝硬化患者的血清转化率可能比健康的志愿者较低，我们假设第二次剂量后28天的血清腔率约为65±5％。 99.9％的置信区间所需的样本量为985。假设辍学率为10％，样本量约为1100例肝硬化患者。同样，将有1100名非律患者作为对照组招募。

• 干涉：

  第2天和第28天的2剂量（0.5 ml）AZD1222（Covishield）

• 监视和评估：

SARS COV2血清IgG水平和中和抗体滴度：

基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，28周（或第二次剂量后24周），40周（或第二次剂量后36周）和52周（或第二次剂量后48周）将通过市售筛查抗SARS-COV-2 IgG化学发光免疫测定（CLIA）SARS-COV-2 IgG（Ortho Clinical Diagnostics，Raritan，NJ，USA）在Vitros ECI/ECIQ/3600自动化仪器上。结果将以血清/切除比≥1的反应性表示，而无反应性<1 s/co比。

所有反应性样品都将进一步处理，以测量利用替代病毒中和基于基于基于的ELISA的商业测定（SVNT）（Genscript CPASS™SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒）的中和抗体滴度，以寻求对尖峰蛋白的中和抗体响应病毒的。

SARS COV-2感染的实时PCR：

SARSCOV-2感染的诊断将通过在病毒转运培养基中收集的鼻咽和口服拭子上的实时逆转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）的性能确认COV-2病毒（E和RDRP基因）。

主要的IFN-γELISPOT分析。基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，将收集28周（或第二剂后24周），40周（或第二剂剂量后36周）和52周（或第二次剂量后48周）。首先，将使用EX-VIVO干扰素-γ酶联免疫疗法（ELISPOT）测定法评估细胞反应，以枚举抗原特异性T细胞。简而言之，通过密度梯度离心将PBMC从全血中分离出来，立即在90％的胎牛血清中冷冻保存和10％的二甲基亚氧化二甲基氧化物，并转移到液氮中进行储存。

IFN-γELISPOT分析将使用冷冻保存的PBMC进行。简而言之，未分流的PBMC将被融化，以1×106个细胞/mL的浓度重悬于DMEM培养基中，并将在96孔，硝酸纤维素蛋白酶含的岩石中以100μL/孔（1×105个细胞/孔）镀以100μl/孔（1×105个细胞/孔）（（ Millipore Corp，MA）先前涂有抗IFN-γ单克隆抗体的PBS溶液（1-D1K，5μg/ml； Mabtech Technologies，Nacka，瑞典）。除阴性对照AS外，不同的细胞刺激（PMA；植物凝血素1μg/mL和离子霉素）将用作阳性对照。然后，板将在37°C下在37°C下孵育40小时，然后将收获并在ELISPOT中读取并读取ELISPOT并读取读者。疫苗诱导的反应将定义为比基线对单个表位肽的反应增加≥3倍。

T细胞功能：

基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，28周（或第二次剂量后24周），40周（或第二次剂量后36周）和52周（或第二剂二次剂量后48周），将使用外周血单核细胞（PBMC）评估免疫反应测量结果时间点。

为了研究CD4和CD8 T细胞功能，PBMC将在含有10％FBS的RPMI培养基中的96井板中培养，其中有或没有PMA/Ionymycin（阳性对照）（PMA 2 ng/ml; ionomycin1μg/ml; Merck; Merck; Merck; Merck，;德国达姆施塔特（Darmstadt）和10 µg /ml lps（默克，达姆施塔特，德国）在37°C，5％CO2 6-7小时。孵育1小时后，将添加1μg/ml Brefeldin A（美国BD Pharmingen）将其添加到所有井中。孵育后，将细胞表面染色25-30分钟，用抗CD3FITC，抗CD8BV421和抗CD4 PE/Cyanine5.5（CY5），然后用100 µL的透化溶液（BD Biosciences，USA）使用100 µL透化10分钟透化。并将用500 µl 1x细胞处理两次洗涤。洗涤后，将对抗IL-2，IFN-γ和IL-17的细胞内表达进行染色，抗IL2 APC，抗IFN-γPE，抗IL-17 PE-CY7（BD Biosciences和Pharmingens，美国，美国），并将在BD经文流式细胞仪上获取之前，将用PBS洗涤25-30分钟，然后用PBS洗涤并将细胞固定为0.1％PFA。数据将使用FlowJo软件版本10分析。

单核细胞表型和功能的切换：

基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，第28周（或第二剂后24周），40周（或第二剂后36周）和52周（或第二剂后48周）疫苗将诱导促炎细胞因子产生的增加，这取决于受过训练的免疫力先天免疫细胞。我们将在疫苗接种前和使用流量术分析后进行单核细胞的表型和功能。

• 实验：肝肝硬化
  临床，内窥镜，放射学和/或组织学标准证明，在临床研究和/或住院期间建立了肝肝硬化的证据。
  干预：生物学：Covishield
• 主动比较器：非肝肝硬化（健康对照）
  没有主要的呼吸道，心脏合并症或恶性肿瘤或免疫抑制状态
  干预：生物学：Covishield

纳入标准：

以下患者将根据第1组进行研究：

• 年龄18至60岁
• 临床，内窥镜，放射学和/或组织学标准证明，在临床研究和/或住院期间建立了肝肝硬化的证据。
• 基线负SARS-COV19 IgG中和抗体

以下患者（健康对照）将参加研究：

• 年龄18至60岁
• 基线负SARS-COV19 IgG中和抗体
• 没有以前的Covid-19感染
• 没有主要的呼吸道，心脏合并症或恶性肿瘤或免疫抑制状态

排除标准：

• 计划在每次研究疫苗接种前30天内和之后进行研究干预以外的任何疫苗，除了许可的季节性流感疫苗和许可的肺炎球菌疫苗外。将鼓励参与者至少在研究疫苗之前或之后7天接受这种疫苗接种。
• COVID-19的事先或伴随疫苗疗法
• ICU患者
• 血液动力学不稳定的患者，休克
• 严重的脑病，急性肾脏损伤
• 记录或怀疑的败血症，包括胸部感染
• ACLF（慢性肝衰竭急性）
• 明显的心脏或呼吸道合并症
• 已知对疫苗接种过敏
• 事先收到可能影响试验数据解释的研究或许可疫苗（例如，腺病毒载体疫苗，任何冠状病毒疫苗）。
• AZD1222（Covishield）疫苗的任何成分可能会加剧过敏性疾病或反应的病史。
• 任何血管性水肿的史。
• 过敏反应的任何历史。
• 在研究期间怀孕，哺乳或意愿/意愿。
• 任何其他严重的慢性病需要医院专家监督。
• 目前或最近三周有：发烧/咳嗽/肌酸/鼻he/heaptysis/呼吸困难/胸痛/肌痛/恶心/呕吐/腹泻/腹泻/腹部疼痛/腹部疼痛/失去口味

• 为了评估AZD1222（Covishield）（2剂）对肝硬化患者的疗效，如与对照组相比，通过抗体滴度的患者的比例来衡量。 [时间范围：6个月]
• 评估AZD1222（Covishield）（2剂）对肝硬化患者的安全性和耐受性，如与对照组相比，通过BBV152不良事件的患者的比例来衡量。 [时间范围：6个月]

• 研究疫苗接种后免疫细胞的特征。 [时间范围：1年]
  免疫细胞介绍SARS COV2血清IgG水平，主要IFN-γELISPOT分析，CD4，CD8等。
• 研究疫苗接种后细胞因子特征的特征。 [时间范围：1年]
  细胞因子特征是IL-2，IL-17，TNF alpha，IL-6
• 随着时间的推移，对SARS-COV-2核素抗体的治疗后反应（基线为阳性治疗后基线为阳性治疗的基线为阴性）的参与者的比例随着时间的流逝。 [时间范围：1年]
• 使用CDC的标准在第二剂剂量的研究干预后15天或之后，使用SARS-COV-2 RT-PCR阳性症状疾病的第一个病例发生率。 [时间范围：1年]
• 第二剂量的研究干预后15天或更多的SARS-COV-RT-PCR阳性严重或严重症状疾病的发生率。 [时间范围：1年]
• 不良事件的发生率[时间范围：28天]
• 严重不良事件的发生率，医疗参加的不良事件以及特别感兴趣的不利事件。 [时间范围：治疗后第1天]
• 严重不良事件的发生率，医疗参加的不良事件以及特别感兴趣的不利事件。 [时间范围：治疗后第7天]
• 严重不良事件的发生率，医疗参加的不良事件以及特别感兴趣的不利事件。 [时间范围：治疗后第30天]
• 本地和系统性征集不良事件的发生率。 [时间范围：治疗后第7天]
• 确定包括突变菌株在内的新SARS-COV2感染的速率。 [时间范围：1年]
• 确定新的SARS-COV2感染的临床严重程度，包括突变菌株。 [时间范围：1年]
  临床严重程度取决于肺炎的新发作，呼吸衰竭和住院需求

• 研究人群：第1组：肝肝硬化第2组：对照组（健康对照）
• 研究设计：III期，单中心，介入研究
• 研究期：1年，入学期：2021年3月至2021年8月
• 有理由的样本量：

考虑到肝硬化患者的血清转化率可能比健康的志愿者较低，我们假设第二次剂量后28天的血清腔率约为65±5％。 99.9％的置信区间所需的样本量为985。假设辍学率为10％，样本量约为1100例肝硬化患者。同样，将有1100名非律患者作为对照组招募。

• 干涉：

  第2天和第28天的2剂量（0.5 ml）AZD1222（Covishield）

• 监视和评估：

SARS COV2血清IgG水平和中和抗体滴度：

基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，28周（或第二次剂量后24周），40周（或第二次剂量后36周）和52周（或第二次剂量后48周）将通过市售筛查抗SARS-COV-2 IgG化学发光免疫测定（CLIA）SARS-COV-2 IgG（Ortho Clinical Diagnostics，Raritan，NJ，USA）在Vitros ECI/ECIQ/3600自动化仪器上。结果将以血清/切除比≥1的反应性表示，而无反应性<1 s/co比。

所有反应性样品都将进一步处理，以测量利用替代病毒中和基于基于基于的ELISA的商业测定（SVNT）（Genscript CPASS™SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒）的中和抗体滴度，以寻求对尖峰蛋白的中和抗体响应病毒的。

SARS COV-2感染的实时PCR：

SARSCOV-2感染的诊断将通过在病毒转运培养基中收集的鼻咽和口服拭子上的实时逆转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）的性能确认COV-2病毒（E和RDRP基因）。

主要的IFN-γELISPOT分析。基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，将收集28周（或第二剂后24周），40周（或第二剂剂量后36周）和52周（或第二次剂量后48周）。首先，将使用EX-VIVO干扰素-γ酶联免疫疗法（ELISPOT）测定法评估细胞反应，以枚举抗原特异性T细胞。简而言之，通过密度梯度离心将PBMC从全血中分离出来，立即在90％的胎牛血清中冷冻保存和10％的二甲基亚氧化二甲基氧化物，并转移到液氮中进行储存。

IFN-γELISPOT分析将使用冷冻保存的PBMC进行。简而言之，未分流的PBMC将被融化，以1×106个细胞/mL的浓度重悬于DMEM培养基中，并将在96孔，硝酸纤维素蛋白酶含的岩石中以100μL/孔（1×105个细胞/孔）镀以100μl/孔（1×105个细胞/孔）（（ Millipore Corp，MA）先前涂有抗IFN-γ单克隆抗体的PBS溶液（1-D1K，5μg/ml； Mabtech Technologies，Nacka，瑞典）。除阴性对照AS外，不同的细胞刺激（PMA；植物凝血素1μg/mL和离子霉素）将用作阳性对照。然后，板将在37°C下在37°C下孵育40小时，然后将收获并在ELISPOT中读取并读取ELISPOT并读取读者。疫苗诱导的反应将定义为比基线对单个表位肽的反应增加≥3倍。

T细胞功能：

基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，28周（或第二次剂量后24周），40周（或第二次剂量后36周）和52周（或第二剂二次剂量后48周），将使用外周血单核细胞（PBMC）评估免疫反应测量结果时间点。

为了研究CD4和CD8 T细胞功能，PBMC将在含有10％FBS的RPMI培养基中的96井板中培养，其中有或没有PMA/Ionymycin（阳性对照）（PMA 2 ng/ml; ionomycin1μg/ml; Merck; Merck; Merck; Merck，;德国达姆施塔特（Darmstadt）和10 µg /ml lps（默克，达姆施塔特，德国）在37°C，5％CO2 6-7小时。孵育1小时后，将添加1μg/ml Brefeldin A（美国BD Pharmingen）将其添加到所有井中。孵育后，将细胞表面染色25-30分钟，用抗CD3FITC，抗CD8BV421和抗CD4 PE/Cyanine5.5（CY5），然后用100 µL的透化溶液（BD Biosciences，USA）使用100 µL透化10分钟透化。并将用500 µl 1x细胞处理两次洗涤。洗涤后，将对抗IL-2，IFN-γ和IL-17的细胞内表达进行染色，抗IL2 APC，抗IFN-γPE，抗IL-17 PE-CY7（BD Biosciences和Pharmingens，美国，美国），并将在BD经文流式细胞仪上获取之前，将用PBS洗涤25-30分钟，然后用PBS洗涤并将细胞固定为0.1％PFA。数据将使用FlowJo软件版本10分析。

单核细胞表型和功能的切换：

基线时的血液样本（首先剂量），第28天（第一次剂量后4周/28天，就在第二剂剂量之前），8周（或第二次剂量后4周），16周（或第二次剂量后12周） ，第28周（或第二剂后24周），40周（或第二剂后36周）和52周（或第二剂后48周）疫苗将诱导促炎细胞因子产生的增加，这取决于受过训练的免疫力先天免疫细胞。我们将在疫苗接种前和使用流量术分析后进行单核细胞的表型和功能。

• 实验：肝肝硬化
  临床，内窥镜，放射学和/或组织学标准证明，在临床研究和/或住院期间建立了肝肝硬化的证据。
  干预：生物学：Covishield
• 主动比较器：非肝肝硬化（健康对照）
  没有主要的呼吸道，心脏合并症或恶性肿瘤或免疫抑制状态
  干预：生物学：Covishield

纳入标准：

以下患者将根据第1组进行研究：

• 年龄18至60岁
• 临床，内窥镜，放射学和/或组织学标准证明，在临床研究和/或住院期间建立了肝肝硬化的证据。
• 基线负SARS-COV19 IgG中和抗体

以下患者（健康对照）将参加研究：

• 年龄18至60岁
• 基线负SARS-COV19 IgG中和抗体
• 没有以前的Covid-19感染
• 没有主要的呼吸道，心脏合并症或恶性肿瘤或免疫抑制状态

排除标准：

• 计划在每次研究疫苗接种前30天内和之后进行研究干预以外的任何疫苗，除了许可的季节性流感疫苗和许可的肺炎球菌疫苗外。将鼓励参与者至少在研究疫苗之前或之后7天接受这种疫苗接种。
• COVID-19的事先或伴随疫苗疗法
• ICU患者
• 血液动力学不稳定的患者，休克
• 严重的脑病，急性肾脏损伤
• 记录或怀疑的败血症，包括胸部感染
• ACLF（慢性肝衰竭急性）
• 明显的心脏或呼吸道合并症
• 已知对疫苗接种过敏
• 事先收到可能影响试验数据解释的研究或许可疫苗（例如，腺病毒载体疫苗，任何冠状病毒疫苗）。
• AZD1222（Covishield）疫苗的任何成分可能会加剧过敏性疾病或反应的病史。
• 任何血管性水肿的史。
• 过敏反应的任何历史。
• 在研究期间怀孕，哺乳或意愿/意愿。
• 任何其他严重的慢性病需要医院专家监督。
• 目前或最近三周有：发烧/咳嗽/肌酸/鼻he/heaptysis/呼吸困难/胸痛/肌痛/恶心/呕吐/腹泻/腹泻/腹部疼痛/腹部疼痛/失去口味