• i）样本收集[时间范围：2个月]
  样品是从重症监护室（ICU）收集的
• ii）识别肠球菌：[时间范围：2个月]
  通过接种胆汁埃斯库蛋白叠素和生长菌落进一步确定：

  1. 用革兰氏染色染色后显微镜
  2. 过氧化氢酶测试
  3. 在高浓度的NACL上生长（6.5％）
• iii）肠球菌（明胶活性）的毒力标记的表型检测[时间范围：2周]
  通过含有明胶的营养琼脂培养。阳性结果似乎是明胶的液化
• iv）肠球菌（溶血活性）的毒力标记的表型检测[时间范围：1周]
  通过检测血琼脂上的溶血活性
• v）肠球菌毒力标记（酪蛋白酶产生）的表型检测[时间范围：2周]
  通过在含有3％的脱脂牛奶的Muller Hinton琼脂上检测酪蛋白酶产生。
• vi）肠球菌的毒力标记（粘液层的形成）的表型检测[时间范围：1周]
  通过培养在含有5％蔗糖的脑心脏输注琼脂上形成粘液层，将板在37oC下孵育24小时。阳性菌株产生粘液和粘性菌落。
• vii）肠球菌（生物膜形成）的毒力标记的表型检测[时间范围：2周]
  使用微滴定板读取器。生物膜形成被评分为非生物膜形成（ - ），弱 - （+），中度 - （++）和强 - （+++），与A630值≤1、1- ≤2、2-≤3，和> 3，分别
• viii）抗生素灵敏度测试：[时间范围：3个月]
  1. 通过1-椎间盘扩散测试，使用万古霉素30μg，teichoplanin30μg，四环素30μg，氨苄青霉素10μg和红霉素15μg。结果，根据CLSI 2018来解释结果。
  2. e-Test：

  通过E检验测量万古霉素的MICS（最小抑制浓度），以确认分离的肠球菌之间的万古霉素耐药性。结果是根据CLSI指南来解释的。
• IX）最常见的肠球菌的分子鉴定[时间范围：1个月]
  通过常规基因特异性独立PCR，用于大肠杆菌和粪肠球大肠杆菌
• x）毒力基因的分子检测[时间范围：2个月]
  毒力基因的鉴定；凝胶E（明胶酶的基因），ASA1（聚集物质的基因），CYLA（细胞酚激活剂的基因），ESP（肠球菌表面蛋白的基因）HYL（用于透明质酸酶的基因）HYL（用于透明质酸的基因）和粪肠球大肠杆菌的ESP PCR。在用溴化乙锭染色的2％琼脂糖凝胶上可视化放大的产物。染色的凝胶可视化并使用凝胶文档系统进行记录，并在视觉上分析，以通过与100 bp DNA梯子标记直接确定靶基因的PCR扩增子的大小。

纳入标准：

• ICU中的任何患者都有尿路感染，手术伤口感染，腹腔内感染，腹腔内感染，菌血症和感染性心内膜炎的表现。

排除标准：

• 前48小时接受抗生素的患者

• i）样本收集[时间范围：2个月]
  样品是从重症监护室（ICU）收集的
• ii）识别肠球菌：[时间范围：2个月]
  通过接种胆汁埃斯库蛋白叠素和生长菌落进一步确定：

  1. 用革兰氏染色染色后显微镜
  2. 氧化氢' target='_blank'>过氧化氢酶测试
  3. 在高浓度的NACL上生长（6.5％）
• iii）肠球菌（明胶活性）的毒力标记的表型检测[时间范围：2周]
  通过含有明胶的营养琼脂培养。阳性结果似乎是明胶的液化
• iv）肠球菌（溶血活性）的毒力标记的表型检测[时间范围：1周]
  通过检测血琼脂上的溶血活性
• v）肠球菌毒力标记（酪蛋白酶产生）的表型检测[时间范围：2周]
  通过在含有3％的脱脂牛奶的Muller Hinton琼脂上检测酪蛋白酶产生。
• vi）肠球菌的毒力标记（粘液层的形成）的表型检测[时间范围：1周]
  通过培养在含有5％蔗糖的脑心脏输注琼脂上形成粘液层，将板在37oC下孵育24小时。阳性菌株产生粘液和粘性菌落。
• vii）肠球菌（生物膜形成）的毒力标记的表型检测[时间范围：2周]
  使用微滴定板读取器。生物膜形成被评分为非生物膜形成（ - ），弱 - （+），中度 - （++）和强 - （+++），与A630值≤1、1- ≤2、2-≤3，和> 3，分别
• viii）抗生素灵敏度测试：[时间范围：3个月]
  1. 通过1-椎间盘扩散测试，使用万古霉素30μg，teichoplanin30μg，四环素30μg，氨苄青霉素10μg和红霉素15μg。结果，根据CLSI 2018来解释结果。
  2. e-Test：

  通过E检验测量万古霉素的MICS（最小抑制浓度），以确认分离的肠球菌之间的万古霉素耐药性。结果是根据CLSI指南来解释的。
• IX）最常见的肠球菌的分子鉴定[时间范围：1个月]
  通过常规基因特异性独立PCR，用于大肠杆菌和粪肠球大肠杆菌
• x）毒力基因的分子检测[时间范围：2个月]
  毒力基因的鉴定；凝胶E（明胶酶的基因），ASA1（聚集物质的基因），CYLA（细胞酚激活剂的基因），ESP（肠球菌表面蛋白的基因）HYL（用于透明质酸酶的基因）HYL（用于透明质酸的基因）和粪肠球大肠杆菌的ESP PCR。在用溴化乙锭染色的2％琼脂糖凝胶上可视化放大的产物。染色的凝胶可视化并使用凝胶文档系统进行记录，并在视觉上分析，以通过与100 bp DNA梯子标记直接确定靶基因的PCR扩增子的大小。

纳入标准：

• ICU中的任何患者都有尿路感染，手术伤口感染，腹腔内感染，腹腔内感染，菌血症和感染性心内膜炎的表现。

排除标准：

• 前48小时接受抗生素的患者