• 客观响应率（ORR）[时间范围：3。5年]
  根据RECIST v1.1标准，ORR定义为相对于入学受试者总数（CR）或部分反应（PR）的患者百分比。
• 无进展生存率（PFS）[时间范围：3。5年]
  PFS定义为从治疗开始到首先是由于任何原因而导致的客观疾病进展或死亡的第一个文档，以先到者为准。

• 确定使用CFDNA进行第二次进展后RAS WT的MCRC患者的比例[时间范围：3。5年]
• 通过使用CFDNA [时间范围：3。5年]来确定RAS G12C突变的患病率

结直肠癌仍然是男性中最常见的癌症，在沙特阿拉伯中，女性中最常见的癌症是最常见的。近三分之一的患者发生转移性疾病的表现，一旦疾病是转移性，其5年生存率从第1阶段的90％显着降低到14％。液体活检有可能为突变癌表征提供易于获得的遗传生物标志物的热情。表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体被广泛用于治疗不含有RAS突变（RAS野生型）的晚期结直肠癌。因此，在启动全身治疗的患者之前，必须对致癌性RAS突变进行基因分型，例如这些突变的存在预测对EGFR靶向抗体的抗性，例如西妥昔单抗和panitumumab。对这种突变的检测是在组织活检中进行的，因为这是一种侵入性的程序，并且数据表明这种测试可能不会反映出该疾病的真正突变负担，因为单个组织的单个碎片可能不足以反映出反映肿瘤内异质性。越来越多的证据表明，液体活检或基于血液的突变分析可以提供对疾病的更全面的分子特征，并具有最小的侵入性。连续液体活检可以作为鉴定空间和时间异质性的工具，以预测对靶向药物的反应或耐药性，并可以将光线（或消失）散发到特定突变的出现（或消失）中，这些突变可能可能用新的抗癌药物靶向。

循环无细胞DNA（CFDNA）由破裂，坏死或凋亡从细胞释放的小核酸片段组成，现在越来越多地用于检测晚期结直肠癌患者的RAS（和其他）突变。数十年来，KRAS一直是一个“不可能”的目标，直到最近的证据显示出一种针对KRAS G12C突变的新抗癌药物。

研究人员旨在对没有RAS突变（因此在EGFR抑制剂开始）的晚期结直肠癌患者进行CFDNA测试作为基线，将结果与新鲜肿瘤组织的突变分析进行比较，并在首次进展时进行CFDNA，以确定什么突变。已经出现了，特别是寻找KRAS G12C突变，可以用一种新的新型抗癌药物来靶向。这些患者将在12个月内收集（目的是对至少100名患者进行此操作），然后进行诊断（带基线CFDNA），直到对EGFR抑制剂进行进展（在其中采取其他CFDNA样品）。一旦接受，将列出此过程的详细建议。

该项目是独一无二的，因为它检查了晚结直肠癌患者中对抗EGFR抑制剂的抗性机制，确定使用液体活检的特定突变的患病率并检查CFDNA的使用，并可能在促进获得KRAS G12C抑制剂方面具有治疗意义。这样的患者。

结直肠癌仍然是男性中最常见的癌症，在沙特阿拉伯中，女性中最常见的癌症是最常见的。近三分之一的患者发生转移性疾病的表现，一旦疾病是转移性，其5年生存率从第1阶段的90％显着降低到14％。液体活检有可能为突变癌表征提供易于获得的遗传生物标志物的热情。表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体被广泛用于治疗不含有RAS突变（RAS野生型）的晚期结直肠癌。因此，在开始进行全身治疗的患者之前，必须进行致癌性RAS突变的基因分型，例如这些突变的存在预测对EGFR靶向抗体的抗性，例如西妥昔单抗和帕辛单抗。转移性CRC的治疗已变得更加复杂，并且随着发现新的致癌（潜在目标）途径，近年来，精确的医学方法已经发展。转移性结直肠癌的预后从6个月的最佳支持护理中有所改善，到包括抗EGFR抗体在内的多药化学疗法和靶向疗法超过2年。针对CRC中其他单身途径，例如增加血管内皮生长因子抑制剂，也使患者受益。据估计，转移性结直肠癌（MCRC）的患者中有55％将在KRAS和NRA中具有致癌突变。对这种突变的检测是在组织活检中进行的，因为这是一种侵入性的程序，并且数据表明这种测试可能不会反映出该疾病的真正突变负担，因为单个组织的单个碎片可能不足以反映出反映肿瘤内异质性。越来越多的证据表明，液体活检或基于血液的突变分析可以提供对疾病的更全面的分子特征，并具有最小的侵入性。连续液体活检可以作为鉴定空间和时间异质性的工具，以预测对靶向药物的反应或耐药性，并可以将光线（或消失）散发到特定突变的出现（或消失）中，这些突变可能可能用新的抗癌药物靶向。为了解决这一分子异质性，应在治疗过程中使用液体活检在治疗过程中检查转移性结直肠癌患者的基因组谱。

有一些小型研究检查了使用液体活检的MCRC中对抗EGFR单克隆抗体的抗性机制。一项针对西妥昔单抗治疗的37例MCRC患者的研究发现，有40％的患者在进展10时出现了RAS突变）。另一项研究人员对帕尼托蛋白单抗治疗的MCRC患者进行了另一项研究，发现24例患者中有9例（38％）在治疗时出现了KRAS突变，这是对抗EGFR治疗的耐药性机制。此外，在重新挑战EGFR单克隆抗体的MCRC患者时，对有限的患者使用液体活检作为生物标志物的研究较少。这些研究大多数都是回顾性的。但是，其中一个是第一次前瞻性试验，与我们的研究具有类似的方案。其中包括28例患者，报告说，这些患者中有52％是与西妥昔单抗重新挑战的RAS WildType-当这些患者接触到第一行环境中的西妥昔单抗时，这些患者是RAS WildType。这项研究表明，当发现Ras在循环肿瘤DNA上是野生型时，用西盘昔单抗重新挑战可显着改善无进展生存率（12）。这项研究的局限性之一是完成了单个液体活检样品（在用西妥昔单抗重新挑战之前），因此没有显示RAS靶标的预测的“开关”，研究人员计划在我们的试验中研究。此外，在BMC癌症中发布了一项最新的研究方案，研究人员计划研究120名患者并进行每3个月的液体活检分析，而患者使用第一线西妥昔单抗。这是研究RAS靶标的演变，并将其与疾病反应相关联，并帮助指导MCRC患者中EGFR抑制剂的治疗。但是，基于数据有限，目前的准则尚未使用液体活检进行测试，并使用该策略决定是否在第三行设置中对抗EGFR疗法的挑战进行了挑战，这是研究人员希望在这项研究中回答的问题。

循环无细胞DNA（CFDNA）由通过正常细胞和已故细胞的破裂，坏死或凋亡从细胞中释放的小核酸片段组成，现在越来越多地用于检测晚期结直肠癌患者的RAS（和其他）突变。有新的证据表明，G12C RAS突变可以用新型的抗癌剂靶向。

研究人员的目的是对没有RAS突变的晚期结直肠癌患者进行CFDNA测试，即野生型（因此，在EGFR抑制剂上开始 - 这是护理治疗的标准治疗）。这将有助于治疗医师决定是否将这些RAS WT状态的患者抗体单克隆抗体或标准的第三线治疗（Regorafenib或Tas-102）。这些患者将在18个月内收集。第二次进展时的CFDNA测试（即进行第三线全身治疗之前）将确定在进展为第一线治疗后可能患有RAS突变的患者的子集（或其他抗抗药性机制）是否会产生RAS突变。 EGFR单克隆抗体已切换其RAS状态并成为野生型。这将支持EGFR抑制剂在第三线环境中的重新挑战，并具有更改大肠癌治疗指南的潜力。为此，主要研究人员将决定是否与抗EGFR抑制剂重新挑战。研究人员的目的是研究60名患者，并至少在抗甲阵中（抗EGFR mAb）组中有30名患者。

材料和方法

患者将对肿瘤/转移性部位进行护理标准（SOC）活检，以确认诊断并确定RAS状态。一旦RAS野生型和原发性疾病左侧，这些患者将接受抗EGFR MAB（Cetuximab或Panitumumab）的标准化疗（Folfox，Flofiri，Capeox，Xeliri的选择）。疾病进展后，二线全身化疗+/-抗VEGF抗体将根据SOC给予。第二次进展后，将根据纳入标准和同意将患者纳入研究，并将绘制CFDNA血液检查，并将检查RAS状态。如果RAS是WildType，则研究者将决定是使用抗EGFR抗体重新挑战（参见研究模式 - 图1），还是进行SOC第三行化学疗法（Regorafenib或Tas-102）。

使用CT扫描和/或MRI，将每8-12周进行一次疾病评估，并根据RECIST标准v1.1进行报告。

CFDNA下一代测序（NGS）的CFDNA提取血液样本的方法（NGS）将在K2EDTA管（BDACUTAINER®血液收集管，Becton Dickinson，美国富兰克林湖）中收集，并发送到转化病理学实验室。在室温下，在1600×g时，将血浆分数连续两轮离心30分钟与血细胞分离。将收集的等离子体等分并存储在-80°C下直至使用。根据制造商的说明，使用无岩浆细胞总核酸分离试剂盒（Thermo Fisher Scientific，美国沃尔瑟姆），从0.4至5.5 mL的血浆中提取CFDNA。通过Qubit 2.0荧光计（Thermo Fisher Scientific）评估CFDNA数量使用DSDNA HS分析套件评估。使用Agilent Tap Station系统（Agilent Technologies，Santa Clara，美国）评估CFDNA质量。只有在140-200 bp之间具有清晰片段峰的CFDNA样品才能进行分析。

NGS库制备NGS库将在oncomine™Pan-Cancer无细胞测定法（Thermo Fisher Scientific）之后从10 ng的CFDNA制备。我们的通用库制备方案基于两周期的多重接触式PCR反应，温度范围从64°C到58°C，该反应允许放大目标区域并引入唯一的分子标识符。然后使用Agencourt Ampure XP（Beckman Coulter，Brea，USA）以1.5倍的珠子与1.5倍的珠子和纯化的产物在24μl低TE缓冲液中洗脱，然后使用Agencourt Ampure XP（Beckman Coulter，Brea，USA）清除了约100-140 bp长度的标记扩增子。第二轮PCR（18个周期）将以50μL的总体积进行扩增，以扩增纯化的扩增子，并引入含有样品特异性条形码的ION Torrent™标记序列适配器。最终的目标DNA片段库将通过使用Agencourt Ampure XP（Beckman Coulter）进行两步清理，分别以珠子与样品比分别为1.15×和1.0×。然后，纯化的库将1：1000稀释，并使用离子通用定量试剂盒（Thermo Fisher Scientific）通过QPCR进行量化。然后将量化的库存库稀释至100 pm，以进行下游模板准备。

测序NGS库将使用半导体测序技术在离子S5™仪器（Thermo Fisher Scientific）上进行测序。简而言之，计划在Torrent Suite Software™v5.10上进行测序运行，使用ION Chef™仪器（Thermo Fisher Scientific）将库合并并加载在ION 540™芯片上。然后使用500个流量对加载的芯片进行测序。原始数据自动在Torrent Server™上自动处理，并与参考HG19基因组对齐。将根据以下指标为每个样本手动执行QC；每个样品的读数> 15,000,000（对于oncomine™pan-cancer无细胞的测定库白羊座），目标读取> 90％，读取均匀性> 90％，中位分子覆盖> 500倍，中位数读取覆盖范围> 15,000。然后根据制造商的说明对组织NGS库进行测序。然后将QC传递样品的测序数据以BAM格式上传到ION Reporter™分析服务器，以进行变体调用和注释。

血浆样品的数据分析使用OnComine™TagSeq Pan-Cancer液体活检W2.0 Workfrows在ION Reporter™（IR）分析软件v5.10上执行。分析管道还包括信号处理，基本调用，质量得分分配，修剪适配器，PCR重复删除以及对映射质量的控制。通过运行覆盖范围分析插件软件v5.6（Thermo Fisher Scientific）获得每个扩增子的覆盖范围指标。仅当变体具有至少三个分子覆盖率时，才考虑识别的变体，这表明该变体在三个独立的模板分子中检测到了变体。最后，使用综合基因组观看器手动审查所有候选突变。 Qiagen QCI平台和内部OLIMS系统将进行进一步的注释。

• 实验：RAS野生型；研究者选择与抗EGFR RX重新挑战
  干预：药物：研究人员选择与抗EGFR RX重新挑战
• 主动比较器：RAS突变体；研究人员选择SOC第三线RX
  干预：药物：研究人员选择与抗EGFR RX重新挑战

纳入标准：

• 成年患者> 18岁的成年患者被组织学诊断为晚期/转移性结直肠腺癌。

  • 原发性疾病必须在结肠的左侧。
  • ECOG性能状态</= 2。
  • 主要治疗医师认为，入学期间的患者预期寿命超过3个月。
  • 基线的肿瘤特征必须是RAS/ BRAF野生型。
  • 必须有可恢复的可测量疾病。
  • 转移负担</= 3器官受累。
  • 在开始系统治疗前的14天内评估了足够的骨髓，肝脏和肾功能。
  • 在任何研究特定程序之前，已签署知情同意书。

排除标准：

• 腹膜转移的患者。

  • 在调查员看来，预期寿命少于3个月。
  • 拒绝同意。
  • 除了结直肠癌以外的其他恶性肿瘤病史，除了经过严格治疗的皮肤的基底或鳞状细胞癌或子宫颈的原位癌。
  • 孕妇。

• 客观响应率（ORR）[时间范围：3。5年]
  根据RECIST v1.1标准，ORR定义为相对于入学受试者总数（CR）或部分反应（PR）的患者百分比。
• 无进展生存率（PFS）[时间范围：3。5年]
  PFS定义为从治疗开始到首先是由于任何原因而导致的客观疾病进展或死亡的第一个文档，以先到者为准。

• 确定使用CFDNA进行第二次进展后RAS WT的MCRC患者的比例[时间范围：3。5年]
• 通过使用CFDNA [时间范围：3。5年]来确定RAS G12C突变的患病率

结直肠癌仍然是男性中最常见的癌症，在沙特阿拉伯中，女性中最常见的癌症是最常见的。近三分之一的患者发生转移性疾病的表现，一旦疾病是转移性，其5年生存率从第1阶段的90％显着降低到14％。液体活检有可能为突变癌表征提供易于获得的遗传生物标志物的热情。表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体被广泛用于治疗不含有RAS突变（RAS野生型）的晚期结直肠癌。因此，在启动全身治疗的患者之前，必须对致癌性RAS突变进行基因分型，例如这些突变的存在预测对EGFR靶向抗体的抗性，例如西妥昔单抗和panitumumab。对这种突变的检测是在组织活检中进行的，因为这是一种侵入性的程序，并且数据表明这种测试可能不会反映出该疾病的真正突变负担，因为单个组织的单个碎片可能不足以反映出反映肿瘤内异质性。越来越多的证据表明，液体活检或基于血液的突变分析可以提供对疾病的更全面的分子特征，并具有最小的侵入性。连续液体活检可以作为鉴定空间和时间异质性的工具，以预测对靶向药物的反应或耐药性，并可以将光线（或消失）散发到特定突变的出现（或消失）中，这些突变可能可能用新的抗癌药物靶向。

循环无细胞DNA（CFDNA）由破裂，坏死或凋亡从细胞释放的小核酸片段组成，现在越来越多地用于检测晚期结直肠癌患者的RAS（和其他）突变。数十年来，KRAS一直是一个“不可能”的目标，直到最近的证据显示出一种针对KRAS G12C突变的新抗癌药物。

研究人员旨在对没有RAS突变（因此在EGFR抑制剂开始）的晚期结直肠癌患者进行CFDNA测试作为基线，将结果与新鲜肿瘤组织的突变分析进行比较，并在首次进展时进行CFDNA，以确定什么突变。已经出现了，特别是寻找KRAS G12C突变，可以用一种新的新型抗癌药物来靶向。这些患者将在12个月内收集（目的是对至少100名患者进行此操作），然后进行诊断（带基线CFDNA），直到对EGFR抑制剂进行进展（在其中采取其他CFDNA样品）。一旦接受，将列出此过程的详细建议。

该项目是独一无二的，因为它检查了晚结直肠癌患者中对抗EGFR抑制剂的抗性机制，确定使用液体活检的特定突变的患病率并检查CFDNA的使用，并可能在促进获得KRAS G12C抑制剂方面具有治疗意义。这样的患者。

结直肠癌仍然是男性中最常见的癌症，在沙特阿拉伯中，女性中最常见的癌症是最常见的。近三分之一的患者发生转移性疾病的表现，一旦疾病是转移性，其5年生存率从第1阶段的90％显着降低到14％。液体活检有可能为突变癌表征提供易于获得的遗传生物标志物的热情。表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体被广泛用于治疗不含有RAS突变（RAS野生型）的晚期结直肠癌。因此，在开始进行全身治疗的患者之前，必须进行致癌性RAS突变的基因分型，例如这些突变的存在预测对EGFR靶向抗体的抗性，例如西妥昔单抗和帕辛单抗。转移性CRC的治疗已变得更加复杂，并且随着发现新的致癌（潜在目标）途径，近年来，精确的医学方法已经发展。转移性结直肠癌的预后从6个月的最佳支持护理中有所改善，到包括抗EGFR抗体在内的多药化学疗法和靶向疗法超过2年。针对CRC中其他单身途径，例如增加血管内皮生长因子抑制剂，也使患者受益。据估计，转移性结直肠癌（MCRC）的患者中有55％将在KRAS和NRA中具有致癌突变。对这种突变的检测是在组织活检中进行的，因为这是一种侵入性的程序，并且数据表明这种测试可能不会反映出该疾病的真正突变负担，因为单个组织的单个碎片可能不足以反映出反映肿瘤内异质性。越来越多的证据表明，液体活检或基于血液的突变分析可以提供对疾病的更全面的分子特征，并具有最小的侵入性。连续液体活检可以作为鉴定空间和时间异质性的工具，以预测对靶向药物的反应或耐药性，并可以将光线（或消失）散发到特定突变的出现（或消失）中，这些突变可能可能用新的抗癌药物靶向。为了解决这一分子异质性，应在治疗过程中使用液体活检在治疗过程中检查转移性结直肠癌患者的基因组谱。

有一些小型研究检查了使用液体活检的MCRC中对抗EGFR单克隆抗体的抗性机制。一项针对西妥昔单抗治疗的37例MCRC患者的研究发现，有40％的患者在进展10时出现了RAS突变）。另一项研究人员对帕尼托蛋白单抗治疗的MCRC患者进行了另一项研究，发现24例患者中有9例（38％）在治疗时出现了KRAS突变，这是对抗EGFR治疗的耐药性机制。此外，在重新挑战EGFR单克隆抗体的MCRC患者时，对有限的患者使用液体活检作为生物标志物的研究较少。这些研究大多数都是回顾性的。但是，其中一个是第一次前瞻性试验，与我们的研究具有类似的方案。其中包括28例患者，报告说，这些患者中有52％是与西妥昔单抗重新挑战的RAS WildType-当这些患者接触到第一行环境中的西妥昔单抗时，这些患者是RAS WildType。这项研究表明，当发现Ras在循环肿瘤DNA上是野生型时，用西盘昔单抗重新挑战可显着改善无进展生存率（12）。这项研究的局限性之一是完成了单个液体活检样品（在用西妥昔单抗重新挑战之前），因此没有显示RAS靶标的预测的“开关”，研究人员计划在我们的试验中研究。此外，在BMC癌症中发布了一项最新的研究方案，研究人员计划研究120名患者并进行每3个月的液体活检分析，而患者使用第一线西妥昔单抗。这是研究RAS靶标的演变，并将其与疾病反应相关联，并帮助指导MCRC患者中EGFR抑制剂的治疗。但是，基于数据有限，目前的准则尚未使用液体活检进行测试，并使用该策略决定是否在第三行设置中对抗EGFR疗法的挑战进行了挑战，这是研究人员希望在这项研究中回答的问题。

循环无细胞DNA（CFDNA）由通过正常细胞和已故细胞的破裂，坏死或凋亡从细胞中释放的小核酸片段组成，现在越来越多地用于检测晚期结直肠癌患者的RAS（和其他）突变。有新的证据表明，G12C RAS突变可以用新型的抗癌剂靶向。

研究人员的目的是对没有RAS突变的晚期结直肠癌患者进行CFDNA测试，即野生型（因此，在EGFR抑制剂上开始 - 这是护理治疗的标准治疗）。这将有助于治疗医师决定是否将这些RAS WT状态的患者抗体单克隆抗体或标准的第三线治疗（Regorafenib或Tas-102）。这些患者将在18个月内收集。第二次进展时的CFDNA测试（即进行第三线全身治疗之前）将确定在进展为第一线治疗后可能患有RAS突变的患者的子集（或其他抗抗药性机制）是否会产生RAS突变。 EGFR单克隆抗体已切换其RAS状态并成为野生型。这将支持EGFR抑制剂在第三线环境中的重新挑战，并具有更改大肠癌治疗指南的潜力。为此，主要研究人员将决定是否与抗EGFR抑制剂重新挑战。研究人员的目的是研究60名患者，并至少在抗甲阵中（抗EGFR mAb）组中有30名患者。

材料和方法

患者将对肿瘤/转移性部位进行护理标准（SOC）活检，以确认诊断并确定RAS状态。一旦RAS野生型和原发性疾病左侧，这些患者将接受抗EGFR MAB（Cetuximab或Panitumumab）的标准化疗（Folfox，Flofiri，Capeox，Xeliri的选择）。疾病进展后，二线全身化疗+/-抗VEGF抗体将根据SOC给予。第二次进展后，将根据纳入标准和同意将患者纳入研究，并将绘制CFDNA血液检查，并将检查RAS状态。如果RAS是WildType，则研究者将决定是使用抗EGFR抗体重新挑战（参见研究模式 - 图1），还是进行SOC第三行化学疗法（Regorafenib或Tas-102）。

使用CT扫描和/或MRI，将每8-12周进行一次疾病评估，并根据RECIST标准v1.1进行报告。

CFDNA下一代测序（NGS）的CFDNA提取血液样本的方法（NGS）将在K2EDTA管（BDACUTAINER®血液收集管，Becton Dickinson，美国富兰克林湖）中收集，并发送到转化病理学实验室。在室温下，在1600×g时，将血浆分数连续两轮离心30分钟与血细胞分离。将收集的等离子体等分并存储在-80°C下直至使用。根据制造商的说明，使用无岩浆细胞总核酸分离试剂盒（Thermo Fisher Scientific，美国沃尔瑟姆），从0.4至5.5 mL的血浆中提取CFDNA。通过Qubit 2.0荧光计（Thermo Fisher Scientific）评估CFDNA数量使用DSDNA HS分析套件评估。使用Agilent Tap Station系统（Agilent Technologies，Santa Clara，美国）评估CFDNA质量。只有在140-200 bp之间具有清晰片段峰的CFDNA样品才能进行分析。

NGS库制备NGS库将在oncomine™Pan-Cancer无细胞测定法（Thermo Fisher Scientific）之后从10 ng的CFDNA制备。我们的通用库制备方案基于两周期的多重接触式PCR反应，温度范围从64°C到58°C，该反应允许放大目标区域并引入唯一的分子标识符。然后使用Agencourt Ampure XP（Beckman Coulter，Brea，USA）以1.5倍的珠子与1.5倍的珠子和纯化的产物在24μl低TE缓冲液中洗脱，然后使用Agencourt Ampure XP（Beckman Coulter，Brea，USA）清除了约100-140 bp长度的标记扩增子。第二轮PCR（18个周期）将以50μL的总体积进行扩增，以扩增纯化的扩增子，并引入含有样品特异性条形码的ION Torrent™标记序列适配器。最终的目标DNA片段库将通过使用Agencourt Ampure XP（Beckman Coulter）进行两步清理，分别以珠子与样品比分别为1.15×和1.0×。然后，纯化的库将1：1000稀释，并使用离子通用定量试剂盒（Thermo Fisher Scientific）通过QPCR进行量化。然后将量化的库存库稀释至100 pm，以进行下游模板准备。

测序NGS库将使用半导体测序技术在离子S5™仪器（Thermo Fisher Scientific）上进行测序。简而言之，计划在Torrent Suite Software™v5.10上进行测序运行，使用ION Chef™仪器（Thermo Fisher Scientific）将库合并并加载在ION 540™芯片上。然后使用500个流量对加载的芯片进行测序。原始数据自动在Torrent Server™上自动处理，并与参考HG19基因组对齐。将根据以下指标为每个样本手动执行QC；每个样品的读数> 15,000,000（对于oncomine™pan-cancer无细胞的测定库白羊座），目标读取> 90％，读取均匀性> 90％，中位分子覆盖> 500倍，中位数读取覆盖范围> 15,000。然后根据制造商的说明对组织NGS库进行测序。然后将QC传递样品的测序数据以BAM格式上传到ION Reporter™分析服务器，以进行变体调用和注释。

血浆样品的数据分析使用OnComine™TagSeq Pan-Cancer液体活检W2.0 Workfrows在ION Reporter™（IR）分析软件v5.10上执行。分析管道还包括信号处理，基本调用，质量得分分配，修剪适配器，PCR重复删除以及对映射质量的控制。通过运行覆盖范围分析插件软件v5.6（Thermo Fisher Scientific）获得每个扩增子的覆盖范围指标。仅当变体具有至少三个分子覆盖率时，才考虑识别的变体，这表明该变体在三个独立的模板分子中检测到了变体。最后，使用综合基因组观看器手动审查所有候选突变。 Qiagen QCI平台和内部OLIMS系统将进行进一步的注释。

• 实验：RAS野生型；研究者选择与抗EGFR RX重新挑战
  干预：药物：研究人员选择与抗EGFR RX重新挑战
• 主动比较器：RAS突变体；研究人员选择SOC第三线RX
  干预：药物：研究人员选择与抗EGFR RX重新挑战

纳入标准：

• 成年患者> 18岁的成年患者被组织学诊断为晚期/转移性结直肠腺癌。

  • 原发性疾病必须在结肠的左侧。
  • ECOG性能状态</= 2。
  • 主要治疗医师认为，入学期间的患者预期寿命超过3个月。
  • 基线的肿瘤特征必须是RAS/ BRAF野生型。
  • 必须有可恢复的可测量疾病。
  • 转移负担</= 3器官受累。
  • 在开始系统治疗前的14天内评估了足够的骨髓，肝脏和肾功能。
  • 在任何研究特定程序之前，已签署知情同意书。

排除标准：

• 腹膜转移的患者。

  • 在调查员看来，预期寿命少于3个月。
  • 拒绝同意。
  • 除了结直肠癌以外的其他恶性肿瘤病史，除了经过严格治疗的皮肤的基底或鳞状细胞癌或子宫颈的原位癌。
  • 孕妇。