• 不良事件和严重不良事件的发生率[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  国家癌症研究所（NCI）的不良事件公共术语标准（CTCAE），v5.0将用于分级毒性。
• 疾病控制率[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  基于恢复和虹彩测量的成像评估
• 响应持续时间[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  基于恢复和虹彩测量的成像评估
• 无进展生存期[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  基于恢复和虹彩测量的成像评估

患者将通过BO-112和Pembrolizumab的组合进行治疗。 BO-112的IT给药将在最初的7周每周一次（QW）进行一次，然后每三周一次（Q3W）进行一次。 Pembrolizumab Q3W将被施用IV。入学40名患者后，赞助商和研究人员将审查总体反应率（ORR），耐用性（DOR），疾病控制率（DCR）和安全性，并将决定是否启动试验的随后随机阶段。

给药顺序应为pembrolizumab，然后是Bo-112。 BO-112将使用带有20至23口针的结核蛋白（TB）注射器（或等效），在每个给药时以1-2 mg的总剂量为1-2 mg，以1-8肿瘤病变给予。针类型也可以是根据研究者的酌处权，以最好地在病变中分配研究药物。如果病变保持可显着或可通过超声检测到，则可能会发生重复给药，之后，只有pembrolizumab输注才能继续进行。

BO-112可以使用适当的注射器和针类型的病变位置，将其用于多个可及性病变，以便重复给药。给药多种病变的基本原理是针对更广泛的遗传突变和抗原多样性产生免疫反应，而单个病变中可能会产生免疫反应，这反过来又有望减少肿瘤免疫逃生的机会。

• 药物：BO-112和Pembrolizumab
  患者将通过BO-112和Pembrolizumab的组合进行治疗。给药顺序应为pembrolizumab，然后是BO-112。 BO-112将使用带有20至23口针的结核蛋白（TB）注射器（或等效），在每个给药时以1-2 mg的总剂量为1-2 mg肿瘤病变。
• 程序：组织活检
  前后（如果可行的）治疗肿瘤组织活检将用于相关研究。

纳入标准：

1. 愿意并且能够给予书面知情同意书。
2. 在知情同意的日期≥18岁。
3. 东部合作肿瘤学集团（ECOG）的性能状态为0或1。
4. 组织学确认的皮肤或粘膜黑色素瘤的诊断。
5. 已知的BRAF状态。

6. 具有不可切除的第三阶段或IV期黑色素瘤。患者必须采用抗PD-1/L1单克隆抗体（MAB）进行治疗，或与其他检查点抑制剂或其他疗法结合使用。 PD-1治疗进展是通过满足以下所有标准来定义的：

   1. 接受批准的抗PD-1/L1 mAB的标准剂量至少接受6周的标准剂量。
   2. RECIST v1.1定义，在PD-1/L1上或之后证明了疾病进展（PD）。在没有快速临床进展的情况下，自第一个记录的PD之日起不少于四个星期，应通过第二次评估来确认PD的最初证据。
   3. 抗PD-1/L1 mAb的最后剂量从12周内记录了进行性疾病。

   我。这项决定是由研究者做出的。一旦确认PD，PD文档的初始日期将被视为疾病进展日期。

7. 作为第一线治疗的一部分，基于抗PD-1的治疗应该是全身疗法的最后一系列。允许在NEO或辅助设置中进行事先处理。
8. 至少一个可恢复1.1的肿瘤病变可测量并适合注射。
9. 至少可容纳每周注射的一种可及性肿瘤病变。如果肝脏是注射的部位，则在肝脏外至少存在一个额外的肿瘤病变，可拟合注射。
10. 愿意提供研究持续时间所需的生物样品，包括新鲜的肿瘤活检样本。注意：如果可能的话，活检病变应为非靶向病变。

11. 在第一次剂量治疗之前2周内获得的以下实验室结果所定义的充分血液学和器官功能：

    1. 绝对中性粒细胞计数（ANC）≥1.5x 10^9/l
    2. 血小板计数≥100x 10^9/l
    3. 血红蛋白（HGB）≥9g/dl
    4. 天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）≤2.5倍正常的上限（ULN）（如果存在肝转移，则为5×ULN）
    5. 血清总胆红素≤1.5×ULN或直接胆红素≤ULN≤ULN的参与者，胆红素水平> 1.5×ULN
    6. 凝血酶原时间（PT）（或国际标准化比率[INR]）在正常限制内激活的部分凝血酶原时间（APTT）
    7. 血清白蛋白≥3g/dl
    8. 血清肌酐≤1.5×ULN或肌酐清除率≥30ml/min（根据机构标准计算）
12. 在接受研究药物注射之前的72小时内，生育潜力的女性患者应在72小时内患有阴性尿液或血清妊娠。如果尿液测试为阳性或不能确认为阴性，则需要进行血清妊娠试验。

13. 未经怀孕，母乳喂养或期望在预计的研究持续时间内构思或父亲的女性患者，从最后一次研究治疗后的120天进行筛查访问开始。

    从研究开始，从研究开始到接受最后剂量的研究药物后的120天，育儿潜力的女性应愿意使用2种节育方法，或在手术上或戒除异性恋活动。生育潜力的患者是那些尚未通过手术灭菌或未经月经持续超过1年的患者。

    如果愿意使用2种节育方法或被认为极不可能怀孕，则可能会招募非怀孕的非胸中喂养妇女。高度不太可能定义为1）手术灭菌，或2）绝经后（≥45岁且没有大于1年的女性将被视为绝经后的月经），或者3）没有异性恋活跃研究持续时间。两种避孕方法可以是：两种障碍方法或一种障碍方法以及防止妊娠的荷尔蒙方法。

14. 应告知患者，如果研究期间怀孕，服用研究药物可能涉及未知的胎儿风险（未出生婴儿）。为了参与研究，他们必须遵守避孕要求（如上所述）。如果有任何问题认为患者不会可靠地遵守避孕的要求，则不应将患者输入研究。
15. 从研究开始到接受研究药物后的120天，男性患者应同意使用适当的避孕方法。

16. 在可以包括人类免疫缺陷病毒（HIV）阳性患者的国家中，受HIV感染的参与者必须接受抗返回病毒疗法（ART），并且患有良好的HIV感染/疾病，定义为：

    1. 筛查时，ART的参与者必须具有CD4+ T细胞计数> 350个单元/mm3；
    2. ART的参与者必须在筛查时使用本地可用的测定法和至少12周的本地分析来实现和维持定义为确认的HIV RNA水平以下确认的HIV RNA水平或资格的下限（低于检测极限）筛选之前；
    3. 在研究入学前至少4周（第1天）至少4周，ART的参与者必须处于稳定方案，没有药物或剂量修饰的情况下进行稳定方案。
17. 能够并且愿意遵守学习和后续程序。

排除标准

1. 卵子黑色素瘤。
2. 由于免疫检查点抑制剂需要全身性类固醇超过2周而引起的先前3-4级IRAE。
3. 先前的肿瘤内治疗。

4. 如果肝病变是注射的部位：

   1. 宏观肿瘤浸润到主要的门静脉，肝静脉或静脉腔；
   2. 门血栓形成' target='_blank'>静脉血栓形成；
   3. 肝病的事先栓塞；
   4. 在过去6个月中，射频，冷冻疗法或微波消融；
   5. 儿童b或c;
   6. AST，ALT和胆红素大于正常极限。
5. 肿瘤活检和注射肝转移（ES）的禁忌症，例如凝血病，治疗剂量抗凝剂抗凝剂治疗和对诸如氯吡格雷等长效剂的治疗，无法安全停止。
6. 在研究治疗的第4周内的4周内，化学疗法或生物癌症治疗。注意：由于以前的疗法≤1级或基线，参与者必须从所有不良事件（AE）中恢复。 ≤2级神经病的参与者可能符合条件。
7. 姑息治疗后1周内进行姑息放疗。受试者必须从所有与辐射相关的毒性中恢复过来，不需要皮质类固醇，并且没有放射性肺炎。
8. 临床活跃的中枢神经系统（CNS）转移和/或癌性脑膜炎。具有先前治疗的脑转移的受试者，只要放射学稳定，即至少可以通过重复成像进行4周进展的证据（请注意，请注意在研究筛查期间进行重复成像），临床稳定，并且不需要类固醇治疗，在第一次剂量研究治疗之前至少14天。
9. 第二次恶性肿瘤的病史，除非已完成潜在的治疗治疗，否则没有证据表明2年。
10. 对BO-112和/或任何赋形剂过敏。
11. 对Pembrolizumab和/或任何赋形剂过敏。
12. 需要全身治疗的主动感染。
13. 需要类固醇或当前肺炎的（非感染）肺炎病史。
14. 活跃的自身免疫性疾病需要在过去2年内进行全身治疗（即使用修饰剂，皮质类固醇或免疫抑制药物）。替代疗法（例如，甲状腺素，胰岛素或生理性皮质类固醇替代疗法用于肾上腺或垂体不足）不被视为一种全身治疗的形式，并且被允许。
15. 在入学前的28天内接受全身免疫抑制治疗，但鼻内，局部和吸入的皮质类固醇或口服皮质类固醇的生理剂量不超过泼尼松或等效的生理剂量。
16. 艾滋病毒感染的参与者有Kaposi肉瘤和/或多中心Castleman病史。

17. 血清反应症适用于乙型肝炎病毒（HBV）活跃病毒感染的证据。乙型肝炎表面抗原阴性和HBV病毒DNA阴性的患者符合条件。

    1. 患有HBV但已接受抗病毒药治疗并显示不可检测的病毒DNA的患者符合条件。
    2. 由于HBV疫苗而具有血清阳性的患者符合条件。

18. 丙型肝炎病毒（HCV）的活性病毒感染和活性病毒感染。

    A。患有HCV但已接受抗病毒药治疗的患者符合条件6个月的抗病毒药治疗且未显示可检测到的HCV病毒DNA。

19. 在研究药物的第28天内，已接收了活疫苗。
20. 同种异体组织或固体器官移植的历史。
21. 目前正在参与或参加了研究剂的研究或在第一次剂量研究治疗之前的4周内使用了研究设备（在研究研究的后续阶段的患者可能会参与在上一个研究剂的最后剂量后4周）。
22. 在研究人员认为，任何具有临床意义的精神病，社会或医学状况都可以增加患者的风险，干扰方案依从性或影响患者给予知情同意的能力。

• 不良事件和严重不良事件的发生率[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  国家癌症研究所（NCI）的不良事件公共术语标准（CTCAE），v5.0将用于分级毒性。
• 疾病控制率[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  基于恢复和虹彩测量的成像评估
• 响应持续时间[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  基于恢复和虹彩测量的成像评估
• 无进展生存期[时间范围：整个研究完成，平均2年]
  基于恢复和虹彩测量的成像评估

患者将通过BO-112和Pembrolizumab的组合进行治疗。 BO-112的IT给药将在最初的7周每周一次（QW）进行一次，然后每三周一次（Q3W）进行一次。 Pembrolizumab Q3W将被施用IV。入学40名患者后，赞助商和研究人员将审查总体反应率（ORR），耐用性（DOR），疾病控制率（DCR）和安全性，并将决定是否启动试验的随后随机阶段。

给药顺序应为pembrolizumab，然后是Bo-112。 BO-112将使用带有20至23口针的结核蛋白（TB）注射器（或等效），在每个给药时以1-2 mg的总剂量为1-2 mg，以1-8肿瘤病变给予。针类型也可以是根据研究者的酌处权，以最好地在病变中分配研究药物。如果病变保持可显着或可通过超声检测到，则可能会发生重复给药，之后，只有pembrolizumab输注才能继续进行。

BO-112可以使用适当的注射器和针类型的病变位置，将其用于多个可及性病变，以便重复给药。给药多种病变的基本原理是针对更广泛的遗传突变和抗原多样性产生免疫反应，而单个病变中可能会产生免疫反应，这反过来又有望减少肿瘤免疫逃生的机会。

• 药物：BO-112和Pembrolizumab
  患者将通过BO-112和Pembrolizumab的组合进行治疗。给药顺序应为pembrolizumab，然后是BO-112。 BO-112将使用带有20至23口针的结核蛋白（TB）注射器（或等效），在每个给药时以1-2 mg的总剂量为1-2 mg肿瘤病变。
• 程序：组织活检
  前后（如果可行的）治疗肿瘤组织活检将用于相关研究。

纳入标准：

1. 愿意并且能够给予书面知情同意书。
2. 在知情同意的日期≥18岁。
3. 东部合作肿瘤学集团（ECOG）的性能状态为0或1。
4. 组织学确认的皮肤或粘膜黑色素瘤的诊断。
5. 已知的BRAF状态。

6. 具有不可切除的第三阶段或IV期黑色素瘤。患者必须采用抗PD-1/L1单克隆抗体（MAB）进行治疗，或与其他检查点抑制剂或其他疗法结合使用。 PD-1治疗进展是通过满足以下所有标准来定义的：

   1. 接受批准的抗PD-1/L1 mAB的标准剂量至少接受6周的标准剂量。
   2. RECIST v1.1定义，在PD-1/L1上或之后证明了疾病进展（PD）。在没有快速临床进展的情况下，自第一个记录的PD之日起不少于四个星期，应通过第二次评估来确认PD的最初证据。
   3. 抗PD-1/L1 mAb的最后剂量从12周内记录了进行性疾病。

   我。这项决定是由研究者做出的。一旦确认PD，PD文档的初始日期将被视为疾病进展日期。

7. 作为第一线治疗的一部分，基于抗PD-1的治疗应该是全身疗法的最后一系列。允许在NEO或辅助设置中进行事先处理。
8. 至少一个可恢复1.1的肿瘤病变可测量并适合注射。
9. 至少可容纳每周注射的一种可及性肿瘤病变。如果肝脏是注射的部位，则在肝脏外至少存在一个额外的肿瘤病变，可拟合注射。
10. 愿意提供研究持续时间所需的生物样品，包括新鲜的肿瘤活检样本。注意：如果可能的话，活检病变应为非靶向病变。

11. 在第一次剂量治疗之前2周内获得的以下实验室结果所定义的充分血液学和器官功能：

    1. 绝对中性粒细胞计数（ANC）≥1.5x 10^9/l
    2. 血小板计数≥100x 10^9/l
    3. 血红蛋白（HGB）≥9g/dl
    4. 天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）≤2.5倍正常的上限（ULN）（如果存在肝转移，则为5×ULN）
    5. 血清总胆红素≤1.5×ULN或直接胆红素≤ULN≤ULN的参与者，胆红素水平> 1.5×ULN
    6. 凝血酶原时间（PT）（或国际标准化比率[INR]）在正常限制内激活的部分凝血酶原时间（APTT）
    7. 血清白蛋白≥3g/dl
    8. 血清肌酐≤1.5×ULN或肌酐清除率≥30ml/min（根据机构标准计算）
12. 在接受研究药物注射之前的72小时内，生育潜力的女性患者应在72小时内患有阴性尿液或血清妊娠。如果尿液测试为阳性或不能确认为阴性，则需要进行血清妊娠试验。

13. 未经怀孕，母乳喂养或期望在预计的研究持续时间内构思或父亲的女性患者，从最后一次研究治疗后的120天进行筛查访问开始。

    从研究开始，从研究开始到接受最后剂量的研究药物后的120天，育儿潜力的女性应愿意使用2种节育方法，或在手术上或戒除异性恋活动。生育潜力的患者是那些尚未通过手术灭菌或未经月经持续超过1年的患者。

    如果愿意使用2种节育方法或被认为极不可能怀孕，则可能会招募非怀孕的非胸中喂养妇女。高度不太可能定义为1）手术灭菌，或2）绝经后（≥45岁且没有大于1年的女性将被视为绝经后的月经），或者3）没有异性恋活跃研究持续时间。两种避孕方法可以是：两种障碍方法或一种障碍方法以及防止妊娠的荷尔蒙方法。

14. 应告知患者，如果研究期间怀孕，服用研究药物可能涉及未知的胎儿风险（未出生婴儿）。为了参与研究，他们必须遵守避孕要求（如上所述）。如果有任何问题认为患者不会可靠地遵守避孕的要求，则不应将患者输入研究。
15. 从研究开始到接受研究药物后的120天，男性患者应同意使用适当的避孕方法。

16. 在可以包括人类免疫缺陷病毒（HIV）阳性患者的国家中，受HIV感染的参与者必须接受抗返回病毒疗法（ART），并且患有良好的HIV感染/疾病，定义为：

    1. 筛查时，ART的参与者必须具有CD4+ T细胞计数> 350个单元/mm3；
    2. ART的参与者必须在筛查时使用本地可用的测定法和至少12周的本地分析来实现和维持定义为确认的HIV RNA水平以下确认的HIV RNA水平或资格的下限（低于检测极限）筛选之前；
    3. 在研究入学前至少4周（第1天）至少4周，ART的参与者必须处于稳定方案，没有药物或剂量修饰的情况下进行稳定方案。
17. 能够并且愿意遵守学习和后续程序。

排除标准

1. 卵子黑色素瘤。
2. 由于免疫检查点抑制剂需要全身性类固醇超过2周而引起的先前3-4级IRAE。
3. 先前的肿瘤内治疗。

4. 如果肝病变是注射的部位：

   1. 宏观肿瘤浸润到主要的门静脉，肝静脉或静脉腔；
   2. 门血栓形成' target='_blank'>血栓形成' target='_blank'>静脉血栓形成' target='_blank'>血栓形成；
   3. 肝病的事先栓塞；
   4. 在过去6个月中，射频，冷冻疗法或微波消融；
   5. 儿童b或c;
   6. AST，ALT和胆红素大于正常极限。
5. 肿瘤活检和注射肝转移（ES）的禁忌症，例如凝血病，治疗剂量抗凝剂抗凝剂治疗和对诸如氯吡格雷等长效剂的治疗，无法安全停止。
6. 在研究治疗的第4周内的4周内，化学疗法或生物癌症治疗。注意：由于以前的疗法≤1级或基线，参与者必须从所有不良事件（AE）中恢复。 ≤2级神经病的参与者可能符合条件。
7. 姑息治疗后1周内进行姑息放疗。受试者必须从所有与辐射相关的毒性中恢复过来，不需要皮质类固醇，并且没有放射性肺炎。
8. 临床活跃的中枢神经系统（CNS）转移和/或癌性脑膜炎。具有先前治疗的脑转移的受试者，只要放射学稳定，即至少可以通过重复成像进行4周进展的证据（请注意，请注意在研究筛查期间进行重复成像），临床稳定，并且不需要类固醇治疗，在第一次剂量研究治疗之前至少14天。
9. 第二次恶性肿瘤的病史，除非已完成潜在的治疗治疗，否则没有证据表明2年。
10. 对BO-112和/或任何赋形剂过敏。
11. 对Pembrolizumab和/或任何赋形剂过敏。
12. 需要全身治疗的主动感染。
13. 需要类固醇或当前肺炎的（非感染）肺炎病史。
14. 活跃的自身免疫性疾病需要在过去2年内进行全身治疗（即使用修饰剂，皮质类固醇或免疫抑制药物）。替代疗法（例如，甲状腺素，胰岛素或生理性皮质类固醇替代疗法用于肾上腺或垂体不足）不被视为一种全身治疗的形式，并且被允许。
15. 在入学前的28天内接受全身免疫抑制治疗，但鼻内，局部和吸入的皮质类固醇或口服皮质类固醇的生理剂量不超过泼尼松或等效的生理剂量。
16. 艾滋病毒感染的参与者有Kaposi肉瘤和/或多中心Castleman病史。

17. 血清反应症适用于乙型肝炎病毒（HBV）活跃病毒感染的证据。乙型肝炎表面抗原阴性和HBV病毒DNA阴性的患者符合条件。

    1. 患有HBV但已接受抗病毒药治疗并显示不可检测的病毒DNA的患者符合条件。
    2. 由于HBV疫苗而具有血清阳性的患者符合条件。

18. 丙型肝炎病毒（HCV）的活性病毒感染和活性病毒感染。

    A。患有HCV但已接受抗病毒药治疗的患者符合条件6个月的抗病毒药治疗且未显示可检测到的HCV病毒DNA。

19. 在研究药物的第28天内，已接收了活疫苗。
20. 同种异体组织或固体器官移植的历史。
21. 目前正在参与或参加了研究剂的研究或在第一次剂量研究治疗之前的4周内使用了研究设备（在研究研究的后续阶段的患者可能会参与在上一个研究剂的最后剂量后4周）。
22. 在研究人员认为，任何具有临床意义的精神病，社会或医学状况都可以增加患者的风险，干扰方案依从性或影响患者给予知情同意的能力。