尽管医疗保健方面取得了进步，但缺血性心脏病（IHD）仍然是全球死亡的主要原因。 IHD通过脂质积累到冠状动脉中发展，随后形成较大的动脉粥样硬化斑块。在心肌梗塞（MI）期间，斑块破裂和随后的闭塞导致心肌死亡。组织迅速用疤痕代替，后来可能导致心力衰竭（HF）。

最佳地，从血液中分析疾病生物标志物，提供对疾病进展的见解，并有助于评估治疗功效。不幸的是，尚未确定IHD的最佳生物标志物。从早期诊断中受益的大量但未成立的IHD患者数量却强调了IHD生物标志物的迫切需求。

表面参考组学是对RNA的转录后修饰的研究，最近已正确重新建立。这个扩展的场正在揭示新的调节层，控制从细胞分裂到细胞死亡的过程。

在RNA物种中，已确定了超过170种修改为转录后标记。这些修饰会影响RNA代谢，包括出口，稳定性和翻译。最常见和深入研究的RNA修饰之一是N6-甲基腺苷（M6A），其丰度和效果取决于其作家，读者和橡皮擦之间的相互作用。

最近的发现表明，在肥大，MI和HF期间，在心肌中M6A动力学的局部失调，信号通路和收缩力与RNA转录相关的相关RNA转录。尽管这些早期报告集中在心肌上，但M6A在IHD期间的循环中的作用仍未开发。

我们假设IHD病理生理学反映在循环RNA的表演中。

IHD-Epitran的目的是通过比较患者的血液表面参考组的队列比较：（1）与冠状动脉血管成形术相关的MI，（2）IHD用选型冠状动脉旁路疗法治疗，用瓣膜更换处理的狭窄和（4）通过计算机断层扫描成像验证的IHD健康控制。 RNA分馏之后是通过质谱法进行定量修饰分析。最终，使用最近发表的基于人工智能的算法进行了与本机序列同时使用M6A识别的纳米孔RNA测序。

背景 - 缺血性心脏病

缺血性心脏病（IHD）的全球患病率为1.265亿人，年死亡率为890万，是死亡的主要原因（GBD合作者，2017年）。 IHD是由于持续的动脉粥样硬化而发展的，这是脂质堆积的过程中的冠状动脉壁。最终，胆固醇和钙的积累形成沉积物，即斑块，从而缩小了血管的狭窄。在心肌梗塞（MI）开始时，这种斑块破裂，导致心肌缺氧死亡依赖于血管的血液供应。在短期内，通过形成僵硬的疤痕来挽救心脏的功能。随着时间的流逝，泵送功能通常会随随之而来的心力衰竭（HF）而恶化。

最佳地，从血液中分析了疾病生物标志物，并既可以洞悉疾病进展，严重程度和帮助评估治疗功效。不幸的是，迄今为止尚未确定IHD的最佳生物标志物。在未诊断的IHD中，大量但未数的人受益于早期诊断，强调了对IHD生物标志物的需求。

背景 - 表演组学

同志的表演学是RNA的转录后修饰的领域，类似于DNA表观遗传学，最近获得了更科学的评价（Saletore 2012）。这个扩展的领域正在揭示一层新的生物调节层，该调节控制了从细胞增殖到死亡的过程。

尽管在RNA物种中已经鉴定出了170多个RNA修饰（Yang 2018），但氮-6位置（M6A）处的腺苷甲基化却是最常见且最深入地研究的腺苷（Liu 2020）。遵循1970年代M6A甲基化mRNA的初步发现（Desrosiers 1974），表演组学仅在过去十年中才重新点燃，随着可靠的体内方法的开发来评估M6A（Dominissini 2012）。这些基于免疫沉淀的方法（IE MERIP-SEQ）促进了特定的M6A标点符号模式的发现和特殊表示的作家（甲基转移酶； Mettl3/14/WTAP1复合物和Mettl16），读取器（读取器；结合蛋白； eg yth protein; eg yth protein家族） ，和橡皮擦（脱甲基酶； ALKBH5； Zaccara 2019）。

已经确定了从YTH域家族中介导M6A效应的多个读者。 YTHDF1-3分别促进mRNA翻译，降解或两者兼而有之。 YTHDC1-2，EIF2，METTL3和核糖体也识别M6A并促进翻译和细胞质分区化（Zaccara 2019）。

M6A水平的变化与许多病理有关，包括癌症，心血管和神经系统疾病（Frye 2016）。使用M6A作家和橡皮擦的敲除和过表达的研究表明，它们在驱动免疫反应，细胞增殖，迁移和凋亡方面的作用（Delaunay 2019）。

背景 - 表演组和心脏

最近发表的一系列研究表明，在高血压期间，M6A和A-TO-I编辑（腺苷对肌苷）的作用（腺苷对肌苷，通过改变基础配对）多样化转录组的作用（Jain 2018），Neovancularization（Kwast 2019）（Kwast 2019） ，心肌肥大（Dorn 2019，Kmietczyk 2019），缺血（Mathiyalagan 2019）和HF（Berulava 2020）。虽然一大量证据表明上映组学是心脏健康和疾病的贡献者，但所有初始研究都集中在心肌上。

基本原理，目标和意义

我们假设IHD的病理生理反映在循环RNA的表演中。例如，核糖体RNA具有长的半衰期，其在冠状动脉循环中的修饰可以响应心脏状态。

IHD-erpitran项目的目标是：（1）建立表面转录组生物标志物的筛查协议，（2）提供对IHD病理生理学的表面转录组的见解，（3）确定一组IHD生物标志物候选者和（4）（4）（4）（4）（4）（4）（4）由于缺乏研究和方法上的局限性，以前被忽略的发展。例如，我们的研究小组报告了RNA甲基转移酶的小分子配体发现（Selberg 2019）。

由于已建议表育翻译学在心脏中发挥调节作用，而IHD- epitran是最早评估IHD中表面转录的血液生物标志物的人之一，因此该项目拥有具有可预期的全球临床益处的科学突破。

方法

研究队列 - 将200名患者招募为四个队列，每人50名患者。第一队队组成的患者组成，患有经皮冠状动脉干预（PCI）的急性MI血运重建的患者，这是一个队列，该队列对急性IHD表型的方式有价值的见解与血液表面分析相似的方式。其次，该项目的主要研究队列将由稳定的IHD表型患者形成，该患者用冠状动脉搭桥术治疗（CABG），并提供有关慢性缺血和冠状动脉粥样硬化的关键信息，这两者都在无声的，即未诊断的，即持续的过程中，即持续的过程IHD。第三，由于狭窄而没有IHD引起的主动脉瓣置换（AVR）疗法的患者为阳性对照组提供不同的心脏病理学，而第四，以及通过冠状动脉计算机断层扫描验证的健康非IHD患者（CT） ），形成项目的控制队列。

研究样本 - IHD- epitran分别从两次收集的tempus（TM）和EDTA血液样本中发现了血细胞和无细胞的RNA的表演。此外，对于MI和CABG队列，将来自右心房附属组织样品的表面转录组被解密以进行参考点。最后，测量了一套补充的HF和IHD生物标志物：NT-ProBNP，HSCRP，SST2和TMAO（Aimo 2019，Ahmadmehrabi 2017和Tibaut 2019）。

RNA方法 - 利用UHPLC-Triple Quadrupole液相色谱量表质谱法（LC-MS/MS）系统（Selberg 2019）的七个碱基修饰进行定量分析，对七个碱基修饰进行了定量分析，对RNA方法的RNA分离和分馏进行了定量分析。经过定量分析，进行了基于抗M6A抗体的RNA，以与测序（即Merip-Seq）相连的M6A标记富含M6A标记。最终，在使用UHPLC-LC-MS/MS和Merip-Seq之后，使用小说中的Nove Nops序列进行了直接的纳米孔长读测序，从而在其天然序列中鉴定M6A标记，并由Liu等人最近开发的算法。 （2019）。算法碱基于通过特定蛋白质纳米孔流动的M6A对电流的特征破坏的识别。

DNA测序 - 为了识别A到I RNA编辑事件，对所有研究参与者进行了整个基因组下一代测序，以实现匹配的DNA-DNA-RNA碱基比较（Park等，2012）。

生物信息学 - 为了解释从测序中产生的大量数据集，生物信息学方案是与Folkhälsan（Karolinska Institutet，Shintaro Katayma博士）和中东技术大学（Nurcan Tuncbag教授）合作开发的。对已知的转录库评估序列。

临床方法 - 超声心动图可深入了解心脏的功能状态，并在初始住院期间和PCI，CABG或AVR后3个月内用预先指定的参数进行。这些心脏病学家的任命分别包括对心绞痛的严重程度评估，分别具有CCS和NYHA等级的劳累呼吸困难。此外，还包括标准化短表36健康调查的发病率自我评估。此外，在手术前和手术后6个月后，收集了与心血管健康相关的患者记录系统搜索，包括医院入院，死亡和药物变化。

功率分析 - 使用RNASEQPS Web工具确定队列大小，旨在评估RNASEQ实验的统计功率（Guo等，2014）。所使用的参数值（错误发现率[FDR] <0.05，测试20 000的基因总数，预测的预后基因1500，最小倍数变化阈值2的差分表达式和预后基因的平均读数为10）是从适用的关于HF期间的上次转录组学的报告（Berulava等，2020）。根据Yoon＆Nam 2017的重点关注的文章，应用了0,215的预后基因分散值，该文章分析了十个公开可用的RNA-seq数据集的分散体，其中四个反映了适用于IHD-EPITRAN的无关复制的分散，该复制品与分配范围累及。在0.15和0.28之间。

基于上述功率分析，每个队列n = 25提供足够的功率（P≥0,95）。为了能够流利地解决可能的放分析误差，执行随后的验证和随访分析，同时增加了一倍。

病人注册

在IHD-Epitran期间收集的个人参与者识别信息数据将主要以HUS的电气形式存储在HUS和Tays的网络硬盘驱动器上，这些硬盘受到基于角色的访问权利的保护。为IHD-Epitran创建了两个单独的注册表：（1）一个关键注册表，其中包含所有参与者识别信息和假名代码之间使用的所有参与者的识别信息以及（2）研究注册表中使用的（完全假名），其中包含所有其他收集的研究信息来自参与者。 IHD-Epitran主任Antti Vento拥有关键注册表的加入权。注册表存储了10年，以实现以后可能的后续项目。

处理了两项注册表的处理文档，以及为研究风险的自我评估文件以及芬兰的IHD-Epitran创建的。这些文件已得到赫尔辛基医院和Uusimaa医院区伦理委员会的审查和批准（DNR。HUS/1211/2020）。

研究小组

Docten Antti Vento是IHD-Epitran项目和Hus Heart and Lung Center的主任。由临床医生，基础研究人员和分析专家组成的跨学科团队使IHD-Epitran能够协同招募，样本收集和准备，然后进行IHD循环RNA的表面转录景观的生物信息学分析。 HUS心脏站的所有心脏病专家Mika Laine，Pasi Karjalainen，Helena Rajala和Satu Suihko将进行CT患者的招募，成像分析，MI患者的治疗，以及第三，MI，MI，MI，CABG和AVR患者的控制约会约会约会。 。来自Tays Heart Hospital的心胸外科医生Jahangir Khan博士和肺门外科医生Jahangir Khan博士以及来自Tays Heart Hospital的心胸外科医生Jahangir Khan Phd和肺中心的心脏和血管外科医生Kari Teittinen以及CABG和AVR患者及其手术及其手术的招募。研究护士Kati Kati Oksaharju和Kati Helleharju分别来自Hus Heart和Lung Center和Tays Heart Hospital，协调患者的招聘，并与Lahja Eurajoki密切合作，冻结后的样本收集，运输和及时存储。该项目将在Docent Esko Kankuri实验室和Eero Mervaala教授（赫尔辛基大学，Cardioreg Group，药理学系）进行。 BM Vilbert Sikorski和MSC Daria Blokhina将协作进行RNA隔离，分馏，UHPLC-LC-MS/MS分析和协议文章配方。此外，Sikorski还与其他IHD-Epitran合着者合作计划了研究协议，应用了研究许可，并继续协调合作者之间的信息交流，并与合着者一起进行结果文章。

伦理

这项研究将根据HUS伦理委员会批准的协议（DNR。HUS/1211/2020）进行。各自的区域和国家董事会将随后评估该协议的多中心样本收集。将注意，以便每个研究参与者都有足够的时间来熟悉研究方案。此后，将举行知情同意讨论，并从参与者那里获得知情同意书。

队列I;急性IHD（STEMI+PCI）：

向CCU出现ST-高度心肌梗塞并接受PCI干预的患者。

队列II；慢性IHD（选修课）：

稳定的心绞痛或呼吸困难的IHD患者注定要基于先前的血管造影进行选修CABG操作。

队列III；主动脉瓣狭窄（选修AVR）：

由于主动脉瓣钙化和狭窄而没有记录在先前的血管造影中，稳定的心绞痛或呼吸困难的患者注定要进行选择性开放手术AVR。

队列IV； IHD阴性控制（冠状动脉CT）：

患者提到心脏单位的冠状动脉CT血管造影，以研究IHD的可能性，例如压迫胸痛或因劳累而引起的呼吸困难，结果负面结果。

• 缺血性心脏病
• 动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病
• 主动脉瓣狭窄
• 急性心肌梗塞

• 诊断测试：血液样本。
  外周血样本（TEMPU（TM）全血样品，EDTA血浆和肝素等离子体，总量为40毫升）在（1）初次住院和（2）住院后三个月的随访访问（未接受随访样本来自冠状动脉CT健康对照患者）。
• 诊断测试：右心房附属组织样品的收集。
  在操作开始时安装心脏肺机或为常规外科手术方案安装，收集了临床上微不足道的一小块心脏右心房附属组织，用于安装心肺机器。
• 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  研究中的患者CABG和AVR队列被邀请参加术前和术后（3个月的时间点），而对于PCI队列，仅由经验丰富的临床心脏病学家领导。任命将包括加拿大心绞痛pectoris（CCS），纽约心脏失败分类（NYHA）分类系统和短表36（SF36）健康调查的加拿大心血管社会分类，包括加拿大心血管菌（CCS）的加拿大心血管社会等级的临床解散，状态和评估。 。不邀请CT成像控制队列参加这些任命。
• 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
  为了获得对患者的功能性心脏状况的全面见解，所有任命均对功能和结构参数的超声心动图评估补充。 IHD-Epitran研究的详细超声心动图分析标准在研究计划中预先指定。

• STEMI和PCI的急性IHD

  IHD中的急性缺血是由招募出现在Meilahti心脏护理单位（CCU）的患者招募的患者，并接受了经皮冠状动脉干预（PCI）的体皮影响。这些患者的知情同意和血液样本将在PCI后的最初72小时内收集，无论是在CCU还是医疗病房。

  将此队列纳入IHD-EPITRAN，可以鉴定出代表急性缺血心肌损伤的新型循环表征生物标志物，以及与第二项研究队列相比，IHD急性和慢性状态的尤其有见地的比较。

  干预措施：

  • 诊断测试：血液样本。
  • 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  • 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
• 慢性IHD和选择性CABG

  第二项研究队列组成的稳定IHD表型患者与心绞痛或由中度或重度身体劳累引起的肌肉呼吸困难，分别对应于NYHA或CCS II类IIV，注定要经历选举的冠状动脉旁路（CABG）（CABG）（CABG）作为血运重建方法的操作。为了排除急性事件，稳定症状的持续时间必须超过一个月。

  从IHD-Epitran项目的这一主要队列中获得的血液样本提供了有关循环传播RNA的表面转录景观的洞察力，以鉴定用于稳定IHD的新生物标志物。此外，该患者队列的CABG手术后，正确的心房附属组织的可用性本身提供了宝贵的器官特异性信息，以及至关重要的参考点，可以比较循环中观察到的变化。

  干预措施：

  • 诊断测试：血液样本。
  • 诊断测试：右心房附属组织样品的收集。
  • 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  • 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
• 选修主动脉瓣狭窄（AVS）替代疗法

  第三项研究队列由因主动脉瓣钙化而导致的手术（心脏心脏手术）瓣膜置换的患者组成，而没有IHD作为合并症的患者。至于选择性CABG患者，此处还必须分别对NYHA或CCS II分别进行适度或严重的症状，分别为IIV类。

  该队列将提供有关病理压力过载左心室重塑如何反映到所谓的相对幸免的右心房附属组织和血液RNA的表面转录组的见解。将该数据与前两个IHD研究队列的数据进行比较，可以打开窗口，以评估这些不同病理的可能差异，从而充当“主动”对照组。

  干预措施：

  • 诊断测试：血液样本。
  • 诊断测试：右心房附属组织样品的收集。
  • 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  • 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
• 通过冠状动脉CT验证的IHD阴性健康对照
  第四项研究队列应由梅拉赫蒂心脏单元的冠状动脉层析成像（CT）血管造影成像组成，以便研究动脉粥样硬化动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病（IE IHD）的可能性，例如紧迫（IE Angina pectoris）或Angina pectoris）或Angina pectoris）或劳累引起的异常呼吸困难。根据CT血管造影的结果，仅选择这些患者的血液样本进行进一步研究，该研究显示IHD的负面结果（在冠状动脉动脉中均不可视化动脉粥样硬化链或斑块）。该患者队列在IHD-EPITRAN项目（即阴性对照）中充当关键的IHD健康对照组。
  干预：诊断测试：血液样本。

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纳入标准：

1. 队列I，STEMI + PCI：

   1. 较早的PCI和无声梗塞符合条件。
   2. ECG证实了肌钙蛋白I高程和胸痛的STEMI。
   3. ECG指示的局部损害与TTE中记录的运动障碍有关。
   4. 在急性PCI和血管造影期间，只有一个明显的阻塞。
   5. PCI期间成功的初始冠状动脉再灌注。

2. 队列II，慢性IHD +选择性CABG：

   1. 慢性和CCS或NYHA II-IV症状至少一个月。
   2. 首先和选修课。只能执行心脏操作。

   3. 在经胸超声心动图（TTE）中：

      • 除缺血性外，没有其他心肌病的迹象。
      • 没有病理重塑（瓣膜，心室和正直）。
      • 没有明显的心力衰竭迹象（即LVEF> 25％）

3. 队列III，用于狭窄的选择性主动脉替代疗法（AVR）：

   1. 慢性和CCS或NYHA II-IV症状至少一个月。
   2. 作为开放式心脏手术（假肢或生物造影厂）
   3. 冠状动脉血管造影中没有IHD的迹象。
   4. 双刺和三尖瓣都有资格。

4. 同类IV，IHD阴性健康对照由冠状动脉CT定义：

   1. 计算机断层扫描血管造影结果被归类为动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病阴性。
   2. 没有已知的心脏病。

排除标准：

• 条件限制了预期寿命。
• 组合程序（即CABG+阀）。
• 慢性肾功能不全（Kdigo量表PT-GFR <45/min）。
• 主动炎症/感染过程。
• 已知疾病影响血液或骨髓。
• 结构或功能性心脏病' target='_blank'>先天性心脏病。
• 记录了房颤。
• 临床对照不佳的其他合并症（即不受控制的严重高血压> 170-180/100，糖尿病HBA1C> 60 mmol/l）。
• 胰岛素治疗的糖尿病。

• 赫尔辛基大学
• TAS心脏医院
• 中东技术大学
• FolkhälsanResearech中心
• Karolinska Institutet
• 塔尔图大学

尽管医疗保健方面取得了进步，但缺血性心脏病（IHD）仍然是全球死亡的主要原因。 IHD通过脂质积累到冠状动脉中发展，随后形成较大的动脉粥样硬化斑块。在心肌梗塞（MI）期间，斑块破裂和随后的闭塞导致心肌死亡。组织迅速用疤痕代替，后来可能导致心力衰竭（HF）。

最佳地，从血液中分析疾病生物标志物，提供对疾病进展的见解，并有助于评估治疗功效。不幸的是，尚未确定IHD的最佳生物标志物。从早期诊断中受益的大量但未成立的IHD患者数量却强调了IHD生物标志物的迫切需求。

表面参考组学是对RNA的转录后修饰的研究，最近已正确重新建立。这个扩展的场正在揭示新的调节层，控制从细胞分裂到细胞死亡的过程。

在RNA物种中，已确定了超过170种修改为转录后标记。这些修饰会影响RNA代谢，包括出口，稳定性和翻译。最常见和深入研究的RNA修饰之一是N6-甲基腺苷（M6A），其丰度和效果取决于其作家，读者和橡皮擦之间的相互作用。

最近的发现表明，在肥大，MI和HF期间，在心肌中M6A动力学的局部失调，信号通路和收缩力与RNA转录相关的相关RNA转录。尽管这些早期报告集中在心肌上，但M6A在IHD期间的循环中的作用仍未开发。

我们假设IHD病理生理学反映在循环RNA的表演中。

IHD-Epitran的目的是通过比较患者的血液表面参考组的队列比较：（1）与冠状动脉血管成形术相关的MI，（2）IHD用选型冠状动脉旁路疗法治疗，用瓣膜更换处理的狭窄和（4）通过计算机断层扫描成像验证的IHD健康控制。 RNA分馏之后是通过质谱法进行定量修饰分析。最终，使用最近发表的基于人工智能的算法进行了与本机序列同时使用M6A识别的纳米孔RNA测序。

背景 - 缺血性心脏病

缺血性心脏病（IHD）的全球患病率为1.265亿人，年死亡率为890万，是死亡的主要原因（GBD合作者，2017年）。 IHD是由于持续的动脉粥样硬化而发展的，这是脂质堆积的过程中的冠状动脉壁。最终，胆固醇和钙的积累形成沉积物，即斑块，从而缩小了血管的狭窄。在心肌梗塞（MI）开始时，这种斑块破裂，导致心肌缺氧死亡依赖于血管的血液供应。在短期内，通过形成僵硬的疤痕来挽救心脏的功能。随着时间的流逝，泵送功能通常会随随之而来的心力衰竭（HF）而恶化。

最佳地，从血液中分析了疾病生物标志物，并既可以洞悉疾病进展，严重程度和帮助评估治疗功效。不幸的是，迄今为止尚未确定IHD的最佳生物标志物。在未诊断的IHD中，大量但未数的人受益于早期诊断，强调了对IHD生物标志物的需求。

背景 - 表演组学

同志的表演学是RNA的转录后修饰的领域，类似于DNA表观遗传学，最近获得了更科学的评价（Saletore 2012）。这个扩展的领域正在揭示一层新的生物调节层，该调节控制了从细胞增殖到死亡的过程。

尽管在RNA物种中已经鉴定出了170多个RNA修饰（Yang 2018），但氮-6位置（M6A）处的腺苷甲基化却是最常见且最深入地研究的腺苷（Liu 2020）。遵循1970年代M6A甲基化mRNA的初步发现（Desrosiers 1974），表演组学仅在过去十年中才重新点燃，随着可靠的体内方法的开发来评估M6A（Dominissini 2012）。这些基于免疫沉淀的方法（IE MERIP-SEQ）促进了特定的M6A标点符号模式的发现和特殊表示的作家（甲基转移酶； Mettl3/14/WTAP1复合物和Mettl16），读取器（读取器；结合蛋白； eg yth protein; eg yth protein家族） ，和橡皮擦（脱甲基酶； ALKBH5； Zaccara 2019）。

已经确定了从YTH域家族中介导M6A效应的多个读者。 YTHDF1-3分别促进mRNA翻译，降解或两者兼而有之。 YTHDC1-2，EIF2，METTL3和核糖体也识别M6A并促进翻译和细胞质分区化（Zaccara 2019）。

M6A水平的变化与许多病理有关，包括癌症，心血管和神经系统疾病（Frye 2016）。使用M6A作家和橡皮擦的敲除和过表达的研究表明，它们在驱动免疫反应，细胞增殖，迁移和凋亡方面的作用（Delaunay 2019）。

背景 - 表演组和心脏

最近发表的一系列研究表明，在高血压期间，M6A和A-TO-I编辑（腺苷对肌苷）的作用（腺苷对肌苷，通过改变基础配对）多样化转录组的作用（Jain 2018），Neovancularization（Kwast 2019）（Kwast 2019） ，心肌肥大（Dorn 2019，Kmietczyk 2019），缺血（Mathiyalagan 2019）和HF（Berulava 2020）。虽然一大量证据表明上映组学是心脏健康和疾病的贡献者，但所有初始研究都集中在心肌上。

基本原理，目标和意义

我们假设IHD的病理生理反映在循环RNA的表演中。例如，核糖体RNA具有长的半衰期，其在冠状动脉循环中的修饰可以响应心脏状态。

IHD-erpitran项目的目标是：（1）建立表面转录组生物标志物的筛查协议，（2）提供对IHD病理生理学的表面转录组的见解，（3）确定一组IHD生物标志物候选者和（4）（4）（4）（4）（4）（4）（4）由于缺乏研究和方法上的局限性，以前被忽略的发展。例如，我们的研究小组报告了RNA甲基转移酶的小分子配体发现（Selberg 2019）。

由于已建议表育翻译学在心脏中发挥调节作用，而IHD- epitran是最早评估IHD中表面转录的血液生物标志物的人之一，因此该项目拥有具有可预期的全球临床益处的科学突破。

方法

研究队列 - 将200名患者招募为四个队列，每人50名患者。第一队队组成的患者组成，患有经皮冠状动脉干预（PCI）的急性MI血运重建的患者，这是一个队列，该队列对急性IHD表型的方式有价值的见解与血液表面分析相似的方式。其次，该项目的主要研究队列将由稳定的IHD表型患者形成，该患者用冠状动脉搭桥术治疗（CABG），并提供有关慢性缺血和冠状动脉粥样硬化的关键信息，这两者都在无声的，即未诊断的，即持续的过程中，即持续的过程IHD。第三，由于狭窄而没有IHD引起的主动脉瓣置换（AVR）疗法的患者为阳性对照组提供不同的心脏病理学，而第四，以及通过冠状动脉计算机断层扫描验证的健康非IHD患者（CT） ），形成项目的控制队列。

研究样本 - IHD- epitran分别从两次收集的tempus（TM）和EDTA血液样本中发现了血细胞和无细胞的RNA的表演。此外，对于MI和CABG队列，将来自右心房附属组织样品的表面转录组被解密以进行参考点。最后，测量了一套补充的HF和IHD生物标志物：NT-ProBNP，HSCRP，SST2和TMAO（Aimo 2019，Ahmadmehrabi 2017和Tibaut 2019）。

RNA方法 - 利用UHPLC-Triple Quadrupole液相色谱量表质谱法（LC-MS/MS）系统（Selberg 2019）的七个碱基修饰进行定量分析，对七个碱基修饰进行了定量分析，对RNA方法的RNA分离和分馏进行了定量分析。经过定量分析，进行了基于抗M6A抗体的RNA，以与测序（即Merip-Seq）相连的M6A标记富含M6A标记。最终，在使用UHPLC-LC-MS/MS和Merip-Seq之后，使用小说中的Nove Nops序列进行了直接的纳米孔长读测序，从而在其天然序列中鉴定M6A标记，并由Liu等人最近开发的算法。 （2019）。算法碱基于通过特定蛋白质纳米孔流动的M6A对电流的特征破坏的识别。

DNA测序 - 为了识别A到I RNA编辑事件，对所有研究参与者进行了整个基因组下一代测序，以实现匹配的DNA-DNA-RNA碱基比较（Park等，2012）。

生物信息学 - 为了解释从测序中产生的大量数据集，生物信息学方案是与Folkhälsan（Karolinska Institutet，Shintaro Katayma博士）和中东技术大学（Nurcan Tuncbag教授）合作开发的。对已知的转录库评估序列。

临床方法 - 超声心动图可深入了解心脏的功能状态，并在初始住院期间和PCI，CABG或AVR后3个月内用预先指定的参数进行。这些心脏病学家的任命分别包括对心绞痛的严重程度评估，分别具有CCS和NYHA等级的劳累呼吸困难。此外，还包括标准化短表36健康调查的发病率自我评估。此外，在手术前和手术后6个月后，收集了与心血管健康相关的患者记录系统搜索，包括医院入院，死亡和药物变化。

功率分析 - 使用RNASEQPS Web工具确定队列大小，旨在评估RNASEQ实验的统计功率（Guo等，2014）。所使用的参数值（错误发现率[FDR] <0.05，测试20 000的基因总数，预测的预后基因1500，最小倍数变化阈值2的差分表达式和预后基因的平均读数为10）是从适用的关于HF期间的上次转录组学的报告（Berulava等，2020）。根据Yoon＆Nam 2017的重点关注的文章，应用了0,215的预后基因分散值，该文章分析了十个公开可用的RNA-seq数据集的分散体，其中四个反映了适用于IHD-EPITRAN的无关复制的分散，该复制品与分配范围累及。在0.15和0.28之间。

基于上述功率分析，每个队列n = 25提供足够的功率（P≥0,95）。为了能够流利地解决可能的放分析误差，执行随后的验证和随访分析，同时增加了一倍。

病人注册

在IHD-Epitran期间收集的个人参与者识别信息数据将主要以HUS的电气形式存储在HUS和Tays的网络硬盘驱动器上，这些硬盘受到基于角色的访问权利的保护。为IHD-Epitran创建了两个单独的注册表：（1）一个关键注册表，其中包含所有参与者识别信息和假名代码之间使用的所有参与者的识别信息以及（2）研究注册表中使用的（完全假名），其中包含所有其他收集的研究信息来自参与者。 IHD-Epitran主任Antti Vento拥有关键注册表的加入权。注册表存储了10年，以实现以后可能的后续项目。

处理了两项注册表的处理文档，以及为研究风险的自我评估文件以及芬兰的IHD-Epitran创建的。这些文件已得到赫尔辛基医院和Uusimaa医院区伦理委员会的审查和批准（DNR。HUS/1211/2020）。

研究小组

Docten Antti Vento是IHD-Epitran项目和Hus Heart and Lung Center的主任。由临床医生，基础研究人员和分析专家组成的跨学科团队使IHD-Epitran能够协同招募，样本收集和准备，然后进行IHD循环RNA的表面转录景观的生物信息学分析。 HUS心脏站的所有心脏病专家Mika Laine，Pasi Karjalainen，Helena Rajala和Satu Suihko将进行CT患者的招募，成像分析，MI患者的治疗，以及第三，MI，MI，MI，CABG和AVR患者的控制约会约会约会。 。来自Tays Heart Hospital的心胸外科医生Jahangir Khan博士和肺门外科医生Jahangir Khan博士以及来自Tays Heart Hospital的心胸外科医生Jahangir Khan Phd和肺中心的心脏和血管外科医生Kari Teittinen以及CABG和AVR患者及其手术及其手术的招募。研究护士Kati Kati Oksaharju和Kati Helleharju分别来自Hus Heart和Lung Center和Tays Heart Hospital，协调患者的招聘，并与Lahja Eurajoki密切合作，冻结后的样本收集，运输和及时存储。该项目将在Docent Esko Kankuri实验室和Eero Mervaala教授（赫尔辛基大学，Cardioreg Group，药理学系）进行。 BM Vilbert Sikorski和MSC Daria Blokhina将协作进行RNA隔离，分馏，UHPLC-LC-MS/MS分析和协议文章配方。此外，Sikorski还与其他IHD-Epitran合着者合作计划了研究协议，应用了研究许可，并继续协调合作者之间的信息交流，并与合着者一起进行结果文章。

伦理

这项研究将根据HUS伦理委员会批准的协议（DNR。HUS/1211/2020）进行。各自的区域和国家董事会将随后评估该协议的多中心样本收集。将注意，以便每个研究参与者都有足够的时间来熟悉研究方案。此后，将举行知情同意讨论，并从参与者那里获得知情同意书。

队列I;急性IHD（STEMI+PCI）：

向CCU出现ST-高度心肌梗塞并接受PCI干预的患者。

队列II；慢性IHD（选修课）：

稳定的心绞痛或呼吸困难的IHD患者注定要基于先前的血管造影进行选修CABG操作。

队列III；主动脉瓣狭窄（选修AVR）：

由于主动脉瓣钙化和狭窄而没有记录在先前的血管造影中，稳定的心绞痛或呼吸困难的患者注定要进行选择性开放手术AVR。

队列IV； IHD阴性控制（冠状动脉CT）：

患者提到心脏单位的冠状动脉CT血管造影，以研究IHD的可能性，例如压迫胸痛或因劳累而引起的呼吸困难，结果负面结果。

• 缺血性心脏病
• 动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病
• 主动脉瓣狭窄
• 急性心肌梗塞

• 诊断测试：血液样本。
  外周血样本（TEMPU（TM）全血样品，EDTA血浆和肝素等离子体，总量为40毫升）在（1）初次住院和（2）住院后三个月的随访访问（未接受随访样本来自冠状动脉CT健康对照患者）。
• 诊断测试：右心房附属组织样品的收集。
  在操作开始时安装心脏肺机或为常规外科手术方案安装，收集了临床上微不足道的一小块心脏右心房附属组织，用于安装心肺机器。
• 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  研究中的患者CABG和AVR队列被邀请参加术前和术后（3个月的时间点），而对于PCI队列，仅由经验丰富的临床心脏病学家领导。任命将包括加拿大心绞痛pectoris（CCS），纽约心脏失败分类（NYHA）分类系统和短表36（SF36）健康调查的加拿大心血管社会分类，包括加拿大心血管菌（CCS）的加拿大心血管社会等级的临床解散，状态和评估。 。不邀请CT成像控制队列参加这些任命。
• 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
  为了获得对患者的功能性心脏状况的全面见解，所有任命均对功能和结构参数的超声心动图评估补充。 IHD-Epitran研究的详细超声心动图分析标准在研究计划中预先指定。

• STEMI和PCI的急性IHD

  IHD中的急性缺血是由招募出现在Meilahti心脏护理单位（CCU）的患者招募的患者，并接受了经皮冠状动脉干预（PCI）的体皮影响。这些患者的知情同意和血液样本将在PCI后的最初72小时内收集，无论是在CCU还是医疗病房。

  将此队列纳入IHD-EPITRAN，可以鉴定出代表急性缺血心肌损伤的新型循环表征生物标志物，以及与第二项研究队列相比，IHD急性和慢性状态的尤其有见地的比较。

  干预措施：

  • 诊断测试：血液样本。
  • 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  • 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
• 慢性IHD和选择性CABG

  第二项研究队列组成的稳定IHD表型患者与心绞痛或由中度或重度身体劳累引起的肌肉呼吸困难，分别对应于NYHA或CCS II类IIV，注定要经历选举的冠状动脉旁路（CABG）（CABG）（CABG）作为血运重建方法的操作。为了排除急性事件，稳定症状的持续时间必须超过一个月。

  从IHD-Epitran项目的这一主要队列中获得的血液样本提供了有关循环传播RNA的表面转录景观的洞察力，以鉴定用于稳定IHD的新生物标志物。此外，该患者队列的CABG手术后，正确的心房附属组织的可用性本身提供了宝贵的器官特异性信息，以及至关重要的参考点，可以比较循环中观察到的变化。

  干预措施：

  • 诊断测试：血液样本。
  • 诊断测试：右心房附属组织样品的收集。
  • 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  • 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
• 选修主动脉瓣狭窄（AVS）替代疗法

  第三项研究队列由因主动脉瓣钙化而导致的手术（心脏心脏手术）瓣膜置换的患者组成，而没有IHD作为合并症的患者。至于选择性CABG患者，此处还必须分别对NYHA或CCS II分别进行适度或严重的症状，分别为IIV类。

  该队列将提供有关病理压力过载左心室重塑如何反映到所谓的相对幸免的右心房附属组织和血液RNA的表面转录组的见解。将该数据与前两个IHD研究队列的数据进行比较，可以打开窗口，以评估这些不同病理的可能差异，从而充当“主动”对照组。

  干预措施：

  • 诊断测试：血液样本。
  • 诊断测试：右心房附属组织样品的收集。
  • 诊断测试：健康调查，临床症状缩放
  • 诊断测试：经胸膜超声心动图（TTE）
• 通过冠状动脉CT验证的IHD阴性健康对照
  第四项研究队列应由梅拉赫蒂心脏单元的冠状动脉层析成像（CT）血管造影成像组成，以便研究动脉粥样硬化动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病（IE IHD）的可能性，例如紧迫（IE Angina pectoris）或Angina pectoris）或Angina pectoris）或劳累引起的异常呼吸困难。根据CT血管造影的结果，仅选择这些患者的血液样本进行进一步研究，该研究显示IHD的负面结果（在冠状动脉动脉中均不可视化动脉粥样硬化链或斑块）。该患者队列在IHD-EPITRAN项目（即阴性对照）中充当关键的IHD健康对照组。
  干预：诊断测试：血液样本。

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纳入标准：

1. 队列I，STEMI + PCI：

   1. 较早的PCI和无声梗塞符合条件。
   2. ECG证实了肌钙蛋白I高程和胸痛的STEMI。
   3. ECG指示的局部损害与TTE中记录的运动障碍' target='_blank'>运动障碍有关。
   4. 在急性PCI和血管造影期间，只有一个明显的阻塞。
   5. PCI期间成功的初始冠状动脉再灌注。

2. 队列II，慢性IHD +选择性CABG：

   1. 慢性和CCS或NYHA II-IV症状至少一个月。
   2. 首先和选修课。只能执行心脏操作。

   3. 在经胸超声心动图（TTE）中：

      • 除缺血性外，没有其他心肌病的迹象。
      • 没有病理重塑（瓣膜，心室和正直）。
      • 没有明显的心力衰竭迹象（即LVEF> 25％）

3. 队列III，用于狭窄的选择性主动脉替代疗法（AVR）：

   1. 慢性和CCS或NYHA II-IV症状至少一个月。
   2. 作为开放式心脏手术（假肢或生物造影厂）
   3. 冠状动脉血管造影中没有IHD的迹象。
   4. 双刺和三尖瓣都有资格。

4. 同类IV，IHD阴性健康对照由冠状动脉CT定义：

   1. 计算机断层扫描血管造影结果被归类为动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病阴性。
   2. 没有已知的心脏病。

排除标准：

• 条件限制了预期寿命。
• 组合程序（即CABG+阀）。
• 慢性肾功能不全（Kdigo量表PT-GFR <45/min）。
• 主动炎症/感染过程。
• 已知疾病影响血液或骨髓。
• 结构或功能性先天性心脏病' target='_blank'>先天性心脏病。
• 记录了房颤。
• 临床对照不佳的其他合并症（即不受控制的严重高血压> 170-180/100，糖尿病HBA1C> 60 mmol/l）。
• 胰岛素治疗的糖尿病。

• 赫尔辛基大学
• TAS心脏医院
• 中东技术大学
• FolkhälsanResearech中心
• Karolinska Institutet
• 塔尔图大学