• 状态2呼吸（GM）[时间范围：在5分钟内。这是给予的
  由苹果酸和谷氨酸诱导的复合I连接呼吸。
• 状态3呼吸（GM3）[时间范围：在10分钟内。这是给予的
  由苹果酸，谷氨酸和ADP诱导的腺苷二磷酸腺苷（ADP）的复杂I连接呼吸。
• 状态3呼吸（GMS3）[时间范围：在15分钟内。这是给予的
  复合I+II连接的呼吸，由苹果酸，谷氨酸，ADP和琥珀酸酯诱导。
• 状态4呼吸（4O）[时间范围：在30分钟内。这是给予的
  复合物I+II连接的呼吸与三磷酸腺苷的产生无关，这是通过寡霉素抑制复合物V引起的。
• 残留氧消耗（ROX）[时间范围：在45分钟内。这是给予的
  呼吸与电子传输链无关，是由紫杉酮抑制复合物I，抗霉素A和寡霉素复合物V引起的。

背景：

在过去的几十年中，心力衰竭的治疗大大改善。尽管有这种改善，但该疾病可能会发展为最终，最终使医生除了心脏移植（HTX）以外没有其他治疗选择。心力衰竭有多种病因。心肌病是任何年龄段的HTX的主要原因，动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病是成年患者第二常见原因。

线粒体功能的改变已被认为是心力衰竭的关键因素。

在移植过程中，疾病的心脏被清除，为收集符合彻底线粒体检查的样品提供了独特的机会。

希望从这项调查中获得的知识将有助于对患病的心肌代谢的重要见解。这种知识可能为开发针对线粒体产生的腺苷 - 三磷酸腺苷 - 三磷酸腺苷供应的处理铺平了道路，以及在失败的心脏中的线粒体功能。

假设：

心力衰竭中看到的病理心肌功能与功能障碍心脏线粒体有关

客观的：

要检查多个病因的末期心脏衰竭中的心脏线粒体功能是否不如移植心脏中的线粒体功能，没有排斥或血管病的迹象。

设计：

从24个外植体心脏分析的心肌线粒体功能将与计划活检时20名HTX患者的内膜活检（植入后1或2年）进行比较。

背景：

在过去的几十年中，心力衰竭的治疗大大改善。尽管有这种改善，但该疾病可能会发展为最终，最终使医生除了心脏移植（HTX）以外没有其他治疗选择。心力衰竭有多种病因。心肌病是任何年龄段的HTX的主要原因，动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病是成年患者第二常见原因。

线粒体功能的改变已被认为是心力衰竭的关键因素。对线粒体在代谢和细胞凋亡的调节中的复杂相互作用的理解为心力衰竭研究带来了新的观点。现在众所周知，心肌线粒体密度的变化及其功能和完整性在心力衰竭期间受到损害。

在移植过程中，疾病的心脏被清除，为收集符合彻底线粒体检查的样品提供了独特的机会。

收集的心肌组织样品将通过高分辨率呼​​吸测定法进行评估，检查磁通胶质纤维纤维的葡萄糖耦合呼吸能力。将患病纤维的呼吸能力与在获得纤维之前1至2年移植1至2年的冠状动脉健康HTX患者的呼吸能力进行比较。

希望从这项调查中获得的知识将有助于对患病的心肌代谢的重要见解。这种知识可能为开发靶向能量底物供应的处理铺平了道路，用于线粒体产生的腺苷 - 三磷酸腺苷产生以及心脏中衰竭的线粒体功能。

假设：

心力衰竭中看到的病理心肌功能与心脏功能失调有关。

客观的：

要检查多个病因的末期心脏衰竭中的心脏线粒体功能是否不如移植心脏中的线粒体功能，没有排斥或血管病的迹象。

设计和端点：

从24个外植体心脏分析的心肌线粒体功能将与计划活检时20名HTX患者的内膜活检（植入后1或2年）进行比较。

终点：1）线粒体呼吸能力。 2）线粒体复合功能，外膜完整性和线粒体含量。

方法：

高分辨率呼​​吸测定法：

高分辨率呼​​吸测定法用于测量内膜活检中的线粒体呼吸能力。经过适当的准备后，将两次活检转移到Oxygraph（Oxygraph-2k； Oroboros，Innsbruck，Austria，Austria）中，以进行高分辨率呼​​吸测定法。将使用底物和抑制剂的滴定来评估纤维中葡萄糖偶联呼吸的滴定，以分步的方式分析线粒体呼吸能力。进行活检后8小时内进行高分辨率呼​​吸测定分析。

经过分析后，组织将在液氮中进行快速冻结，并将其存储在-80摄氏度的研究生物库中，直到检查柠檬酸合酶活性。此后，任何剩余的组织都将被破坏。

电子显微镜：

用于高分辨率呼​​吸测定法的每个活检的样品将用于电子显微镜（EM），以评估线粒体体积密度（MITOVD）和完整性。将肌肉样品固定在戊二醛中24小时，并用Na-Cocodylate缓冲液洗涤4x15分钟，然后再将其铸造在Epon中。 EPON铸造的组织将存储在研究生物库中，直到EM分析为止。肌斑块的超薄切片（60 nm）被切成三个深度，并用乙酸铀酰和柠檬酸铅染色。成像是使用EM 208传输电子显微镜和Megaview III相机进行的。所有纤维以10.000倍的放大速度以随机顺序拍摄。 Mitovd是从线粒体分数区域估计的，最终分析只能使用不同的纤维。

统计数据：

正态分布的数据将表示为平均值±标准偏差；非正常分布的数据将作为中位数和四分位间范围呈现。分类数据表示为绝对值或百分比。直方图和QQ图将用于检查连续值的正态性。组间差异将通过t检验评估正态分布数据和Mann-Whitney U检验非正态分布数据。 p值<0.05的统计显着性。

样本量计算：

目前，尚无对植物人类心脏内膜活检中线粒体呼吸道分析的重测评估。但是，在我们部门对心肌活检的最新研究表明，在1：1平行组设计中，总体样本量为40个受试者，能够识别两组之间的差异（未发表的数据）。

数据收集和处理：

源数据将记录在患者的电子患者记录或特定工作表中。

将构建集中式电子案例报告表（CRF）以进行数据捕获。数据将存储在项目完成之前，之后将其传输到丹麦数据档案。

观点：

HTX是针对患有末期心力衰竭的患者的黄金标准治疗方法，但不能忽略其局限性。首先，该手术伴随着很大的风险，并且很大一部分患者患有急性移植衰竭。此外，HTX患者患严重感染和癌症的风险较高，多达50％的HTX患者患有心脏同种异体移植血管病，在移植后10年，所有这些患者都与死亡率高度相关。因此，如果可以将健康和生活质量保持在可接受的水平，则可以推迟HTX。在这种情况下，线粒体功能似乎是关键的，因为评估心脏失败的线粒体功能的方法可能证明为新的随访算法甚至治疗靶标铺平道路。

• Lund LH，Edwards LB，Kucheryavaya AY，Benden C，Dipchand AI，Goldfarb S，Levvey BJ，Meiser B，Rossano JW，Yusen RD，Stehlik J.心脏移植报告 - 2015年；焦点主题：早期移植失败。 J心脏肺移植。 2015年10月； 34（10）：1244-54。 doi：10.1016/j.healun.2015.08.003。 EPUB 2015 8月28日。
• Murphy E，Ardehali H，Balaban RS，Dilisa F，Dorn GW 2nd，Kitsis RN，Otsu K，Ping P，Rizzuto R，Sack MN，MN，Wallace D，Wallace D，Youle RJ；美国心脏协会基础心血管科学委员会，临床心脏病学委员会和功能基因组学和转化生物学委员会。线粒体功能，生物学和在疾病中的作用：美国心脏协会的科学陈述。 Circ Res。 2016年6月10日； 118（12）：1960-91。 doi：10.1161/res.0000000000000104。 EPUB 2016年4月28日。评论。
• Jespersen NR，Yokota T，StøttrupNB，Bergdahl A，Paelestik KB，Povlsen JA，Dela F，BøtkerHe。通过抑制苹果酸 - 天冬氨酸穿梭的线粒体底物约束，在局部缺血 - 再灌注后可以保留线粒体功能。 J生理学。 2017年6月15日； 595（12）：3765-3780。 doi：10.1113/jp273408。 EPUB 2017 2月27日。
• Gormsen LC，Svart M，Thomsen HH，SøndergaardE，Vendelbo MH，Christensen N，Tolbod LP，Harms HJ，Nielsen R，Nielsen R，Wiggers H，Jessen N，Hansen N，Hansen J，Hansen J，BøtkerHE，MølllerN. Ketone N. Ketone N. ketone N. ketone ketone n.ketone ketone ketone ketone ketone ketone ketone ketone ketone in。心肌葡萄糖摄取并增加人类的血液流动：一项正电子发射断层扫描研究。 J Am Heart Assoc。 2017年2月27日； 6（3）。 PII：E005066。 doi：10.1161/jaha.116.005066。
• Brown DA, Perry JB, Allen ME, Sabbah HN, Stauffer BL, Shaikh SR, Cleland JG, Colucci WS, Butler J, Voors AA, Anker SD, Pitt B, Pieske B, Filippatos G, Greene SJ, Gheorghiade M. Expert consensus文档：线粒体功能是心力衰竭的治疗靶标。 Nat Rev Cardiol。 2017年4月； 14（4）：238-250。 doi：10.1038/nrcardio.2016.203。 EPUB 2016 12月22日。评论。
• Lund LH，Edwards LB，Kucheryavaya AY，Dipchand AI，Benden C，Christie JD，Dobbels F，Kirk R，Rahmel Ao，Yusen RD，Stehlik J；国际心脏和肺部移植学会。国际心脏和肺部移植学会登记册：第三十个官方成人心脏移植报告 - 2013年；焦点主题：年龄。 J心脏肺移植。 2013年10月； 32（10）：951-64。 doi：10.1016/j.healun.2013.08.006。

纳入标准：

• 接受者的知情同意

排除标准：

• 来自外植物心脏的心肌活检不可行

• 状态2呼吸（GM）[时间范围：在5分钟内。这是给予的
  由苹果酸和谷氨酸诱导的复合I连接呼吸。
• 状态3呼吸（GM3）[时间范围：在10分钟内。这是给予的
  由苹果酸，谷氨酸和ADP诱导的腺苷二磷酸腺苷（ADP）的复杂I连接呼吸。
• 状态3呼吸（GMS3）[时间范围：在15分钟内。这是给予的
  复合I+II连接的呼吸，由苹果酸，谷氨酸，ADP和琥珀酸酯诱导。
• 状态4呼吸（4O）[时间范围：在30分钟内。这是给予的
  复合物I+II连接的呼吸与三磷酸腺苷的产生无关，这是通过寡霉素抑制复合物V引起的。
• 残留氧消耗（ROX）[时间范围：在45分钟内。这是给予的
  呼吸与电子传输链无关，是由紫杉酮抑制复合物I，抗霉素A和寡霉素复合物V引起的。

背景：

在过去的几十年中，心力衰竭的治疗大大改善。尽管有这种改善，但该疾病可能会发展为最终，最终使医生除了心脏移植（HTX）以外没有其他治疗选择。心力衰竭有多种病因。心肌病是任何年龄段的HTX的主要原因，动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病是成年患者第二常见原因。

线粒体功能的改变已被认为是心力衰竭的关键因素。

在移植过程中，疾病的心脏被清除，为收集符合彻底线粒体检查的样品提供了独特的机会。

希望从这项调查中获得的知识将有助于对患病的心肌代谢的重要见解。这种知识可能为开发针对线粒体产生的腺苷 - 三磷酸腺苷 - 三磷酸腺苷供应的处理铺平了道路，以及在失败的心脏中的线粒体功能。

假设：

心力衰竭中看到的病理心肌功能与功能障碍心脏线粒体有关

客观的：

要检查多个病因的末期心脏衰竭中的心脏线粒体功能是否不如移植心脏中的线粒体功能，没有排斥或血管病的迹象。

设计：

从24个外植体心脏分析的心肌线粒体功能将与计划活检时20名HTX患者的内膜活检（植入后1或2年）进行比较。

背景：

在过去的几十年中，心力衰竭的治疗大大改善。尽管有这种改善，但该疾病可能会发展为最终，最终使医生除了心脏移植（HTX）以外没有其他治疗选择。心力衰竭有多种病因。心肌病是任何年龄段的HTX的主要原因，动脉疾病' target='_blank'>冠状动脉疾病是成年患者第二常见原因。

线粒体功能的改变已被认为是心力衰竭的关键因素。对线粒体在代谢和细胞凋亡的调节中的复杂相互作用的理解为心力衰竭研究带来了新的观点。现在众所周知，心肌线粒体密度的变化及其功能和完整性在心力衰竭期间受到损害。

在移植过程中，疾病的心脏被清除，为收集符合彻底线粒体检查的样品提供了独特的机会。

收集的心肌组织样品将通过高分辨率呼​​吸测定法进行评估，检查磁通胶质纤维纤维的葡萄糖耦合呼吸能力。将患病纤维的呼吸能力与在获得纤维之前1至2年移植1至2年的冠状动脉健康HTX患者的呼吸能力进行比较。

希望从这项调查中获得的知识将有助于对患病的心肌代谢的重要见解。这种知识可能为开发靶向能量底物供应的处理铺平了道路，用于线粒体产生的腺苷 - 三磷酸腺苷产生以及心脏中衰竭的线粒体功能。

假设：

心力衰竭中看到的病理心肌功能与心脏功能失调有关。

客观的：

要检查多个病因的末期心脏衰竭中的心脏线粒体功能是否不如移植心脏中的线粒体功能，没有排斥或血管病的迹象。

设计和端点：

从24个外植体心脏分析的心肌线粒体功能将与计划活检时20名HTX患者的内膜活检（植入后1或2年）进行比较。

终点：1）线粒体呼吸能力。 2）线粒体复合功能，外膜完整性和线粒体含量。

方法：

高分辨率呼​​吸测定法：

高分辨率呼​​吸测定法用于测量内膜活检中的线粒体呼吸能力。经过适当的准备后，将两次活检转移到Oxygraph（Oxygraph-2k； Oroboros，Innsbruck，Austria，Austria）中，以进行高分辨率呼​​吸测定法。将使用底物和抑制剂的滴定来评估纤维中葡萄糖偶联呼吸的滴定，以分步的方式分析线粒体呼吸能力。进行活检后8小时内进行高分辨率呼​​吸测定分析。

经过分析后，组织将在液氮中进行快速冻结，并将其存储在-80摄氏度的研究生物库中，直到检查柠檬酸合酶活性。此后，任何剩余的组织都将被破坏。

电子显微镜：

用于高分辨率呼​​吸测定法的每个活检的样品将用于电子显微镜（EM），以评估线粒体体积密度（MITOVD）和完整性。将肌肉样品固定在戊二醛中24小时，并用Na-Cocodylate缓冲液洗涤4x15分钟，然后再将其铸造在Epon中。 EPON铸造的组织将存储在研究生物库中，直到EM分析为止。肌斑块的超薄切片（60 nm）被切成三个深度，并用乙酸铀酰和柠檬酸铅染色。成像是使用EM 208传输电子显微镜和Megaview III相机进行的。所有纤维以10.000倍的放大速度以随机顺序拍摄。 Mitovd是从线粒体分数区域估计的，最终分析只能使用不同的纤维。

统计数据：

正态分布的数据将表示为平均值±标准偏差；非正常分布的数据将作为中位数和四分位间范围呈现。分类数据表示为绝对值或百分比。直方图和QQ图将用于检查连续值的正态性。组间差异将通过t检验评估正态分布数据和Mann-Whitney U检验非正态分布数据。 p值<0.05的统计显着性。

样本量计算：

目前，尚无对植物人类心脏内膜活检中线粒体呼吸道分析的重测评估。但是，在我们部门对心肌活检的最新研究表明，在1：1平行组设计中，总体样本量为40个受试者，能够识别两组之间的差异（未发表的数据）。

数据收集和处理：

源数据将记录在患者的电子患者记录或特定工作表中。

将构建集中式电子案例报告表（CRF）以进行数据捕获。数据将存储在项目完成之前，之后将其传输到丹麦数据档案。

观点：

HTX是针对患有末期心力衰竭的患者的黄金标准治疗方法，但不能忽略其局限性。首先，该手术伴随着很大的风险，并且很大一部分患者患有急性移植衰竭。此外，HTX患者患严重感染和癌症的风险较高，多达50％的HTX患者患有心脏同种异体移植血管病，在移植后10年，所有这些患者都与死亡率高度相关。因此，如果可以将健康和生活质量保持在可接受的水平，则可以推迟HTX。在这种情况下，线粒体功能似乎是关键的，因为评估心脏失败的线粒体功能的方法可能证明为新的随访算法甚至治疗靶标铺平道路。

• Lund LH，Edwards LB，Kucheryavaya AY，Benden C，Dipchand AI，Goldfarb S，Levvey BJ，Meiser B，Rossano JW，Yusen RD，Stehlik J.心脏移植报告 - 2015年；焦点主题：早期移植失败。 J心脏肺移植。 2015年10月； 34（10）：1244-54。 doi：10.1016/j.healun.2015.08.003。 EPUB 2015 8月28日。
• Murphy E，Ardehali H，Balaban RS，Dilisa F，Dorn GW 2nd，Kitsis RN，Otsu K，Ping P，Rizzuto R，Sack MN，MN，Wallace D，Wallace D，Youle RJ；美国心脏协会基础心血管科学委员会，临床心脏病学委员会和功能基因组学和转化生物学委员会。线粒体功能，生物学和在疾病中的作用：美国心脏协会的科学陈述。 Circ Res。 2016年6月10日； 118（12）：1960-91。 doi：10.1161/res.0000000000000104。 EPUB 2016年4月28日。评论。
• Jespersen NR，Yokota T，StøttrupNB，Bergdahl A，Paelestik KB，Povlsen JA，Dela F，BøtkerHe。通过抑制苹果酸 - 天冬氨酸穿梭的线粒体底物约束，在局部缺血 - 再灌注后可以保留线粒体功能。 J生理学。 2017年6月15日； 595（12）：3765-3780。 doi：10.1113/jp273408。 EPUB 2017 2月27日。
• Gormsen LC，Svart M，Thomsen HH，SøndergaardE，Vendelbo MH，Christensen N，Tolbod LP，Harms HJ，Nielsen R，Nielsen R，Wiggers H，Jessen N，Hansen N，Hansen J，Hansen J，BøtkerHE，MølllerN. Ketone N. Ketone N. ketone N. ketone ketone n.ketone ketone ketone ketone ketone ketone ketone ketone ketone in。心肌葡萄糖摄取并增加人类的血液流动：一项正电子发射断层扫描研究。 J Am Heart Assoc。 2017年2月27日； 6（3）。 PII：E005066。 doi：10.1161/jaha.116.005066。
• Brown DA, Perry JB, Allen ME, Sabbah HN, Stauffer BL, Shaikh SR, Cleland JG, Colucci WS, Butler J, Voors AA, Anker SD, Pitt B, Pieske B, Filippatos G, Greene SJ, Gheorghiade M. Expert consensus文档：线粒体功能是心力衰竭的治疗靶标。 Nat Rev Cardiol。 2017年4月； 14（4）：238-250。 doi：10.1038/nrcardio.2016.203。 EPUB 2016 12月22日。评论。
• Lund LH，Edwards LB，Kucheryavaya AY，Dipchand AI，Benden C，Christie JD，Dobbels F，Kirk R，Rahmel Ao，Yusen RD，Stehlik J；国际心脏和肺部移植学会。国际心脏和肺部移植学会登记册：第三十个官方成人心脏移植报告 - 2013年；焦点主题：年龄。 J心脏肺移植。 2013年10月； 32（10）：951-64。 doi：10.1016/j.healun.2013.08.006。

纳入标准：

• 接受者的知情同意

排除标准：

• 来自外植物心脏的心肌活检不可行