虽然细菌是CF肺部疾病中的主要因素，但在痰液和支气管肺泡灌洗液（BAL）中通常会分离真菌（BAL），但尚未完全了解它们在CF中的作用。 CF中的真菌感染具有广泛的演示，从瞬态检测到持续感染，急性真菌支气管炎，导致肺部加重，对真菌过敏原的敏感性以及过敏性支气管支气管肺化的曲霉病（ABPA）。尽管有CF患者的ABPA诊断和治疗的临床指南，但在CF真菌疾病的各种表现中，几乎没有有关监测，临床护理和抗真菌治疗的指南和建议。此外，没有ABPA的真菌对临床影响知之甚少。虽然CF中的炎症通常被认为是中性粒细胞和巨噬细胞驱动的过程（TH1），但在临床和动物CF研究中，在存在真菌疾病的存在下，嗜酸性粒细胞和过敏性细胞因子（TH2）已被证明升高。研究还表明，肺功能降低（例如，预测一秒钟内强迫呼气量，PPFEV1）在痰中经常进行真菌检测的个体，以及与假单胞菌感染和使用抗菌素的使用相关。与非CF患者相比，患有CF的成年人也更容易出现真菌敏化，并且具有更高的过敏性鼻炎和特应疗法。在我们中心进行的一项回顾性研究中，我们发现与没有真菌感染的儿童相比，患有间歇性或慢性真菌感染的儿童肺功能的下降速度更快，无论ABPA状态如何（请参阅初步数据）。了解真菌感染是否是由过敏性（TH2）炎症过程驱动的，可能会通过采用类固醇和抗真菌疗法来改变治疗方法，而真菌感染的患者更容易地对抗肺功能下降。有限的研究研究了CF患者中对真菌病原体的过敏性敏感性的频率，小儿CF人群中过敏敏化的频率以及CF真菌感染的独特炎症特征和表型，包括痰液和血清。

假设：我们假设与没有真菌感染的儿童相比，患有CF和真菌感染的儿童将升高过敏性炎症概况，并提高对真菌元素的敏感性。

具体目标1：比较患有和ABPA患者的患者和没有真菌感染的患者的TH2炎症。

• 方法：我们将从25例（1）没有ABPA的真菌感染的患者中获得血清和痰样样品，n = 10（定义为前18个月内的两种阳性真菌培养物），（2）无真菌感染，n = 10， （3）ABPA，n = 5，并测量特定的痰液和血清细胞因子测量，以评估Th2和Th1炎症途径。
• 测量的生物标志物：嗜酸性阳离子阳离子蛋白（ECP），白介素-4（IL4），介体5（IL5），介体-10（IL10）（IL10），白介素-13（IL13）和嗜酸性粒细胞计数在血清和put虫中。
• 预期的结果：与没有真菌感染的人相比，没有APBA的真菌感染的个体将具有炎症的Th2标记升高。我们还将与ABPA作为单独的对照组的人进行比较。我们还将测量Th1标记，以作为CF中看到的先前确定的炎症概况的参考，看看那些具有真菌疾病的人是否偏离了TH2驱动的过程。

具体目标2：与没有真菌感染的患者和ABPA的患者相比，研究无ABPA的CF真菌感染患者对真菌元素的过敏性敏感性。

• 方法：我们将测量特定IgE水平对各种物种（曲霉，念珠菌等）的特定IgE水平的总IgE和血清免疫接种测试。确定真菌敏化。我们还将对患者进行有关环境暴露的调查，以探索与过敏敏化的关系。
• 预期的结果：与没有真菌感染的人相比，没有ABPA的真菌感染的个体更可能表现出对真菌元素的过敏性敏感性。

这项研究的结果将有助于表征与CF真菌感染相关的炎症概况，从而有助于理解CF人群中疾病的传染性和过敏性。因此，CF真菌感染的病理生理学和临床特征的贡献将是理解这一独特的难以治疗生物体的管理选择，护理指南和疾病进展的一步。

招聘：我们建议招募25名CF患者8至25岁的患者，他们同意参加这项横断面研究，以研究真菌感染和ABPA的免疫系统特征。我们计划筛选个人参加常规CF诊所，并就他们参与这项研究的兴趣与他们联系。由此，我们将解释意图安排研究访问的概念，假设和程序。

患者选择：在常规诊所就诊时，研究人员或合格的研究协调员将从CF中心的CF中心招募患者。

研究访问：我们计划在临床稳定期间前瞻性地招募25名患有CF的受试者。受试者将进行一次研究诊所就诊，将与他们在CHCO肺诊所设施的诊所访问一致。以下诊断信息将输入案例报告表：人口统计信息，诊断病史和突变，与CF相关的合并症，历史微生物学结果，包括真菌培养结果，包括调节剂治疗和长期抗生素治疗，以前的过敏测试，以前ABPA的诊断标准（如果适用）。我们还将利用病历中的历史临床数据来建立其他合并症，肺功能趋势和基线，其他细菌感染的病史，过敏诊断史以及其他相关的病史和诊断测试（即先前的CT扫描结果，以前的血液工作等）。将进行以下评估：

• 病历中的历史数据。例子包括与CF相关的合并诊断（例如但不限于CF相关糖尿病，CF肝病，哮喘等），先前的血液检查（例如但不限于血清IgE水平，以前灌洗研究，常规和紧急/入院CF实验室等），先前的肺活量计和肺功能数据，先前的营养和生长数据（BMI，维生素水平等），以前的微生物学和培养数据等。
• 从常规CF诊所获得的BMI测量值
• 高度和体重将要获得并随后计算。
• 从常规CF诊所就诊获得的肺功能测试。肺活量测定法将根据美国胸部社会标准进行，而绝对值将通过全球肺功能启动参考方程进行转换为预测的百分比34。
• 痰收集。自发期望的痰液将尽可能使用。该患者将在诊所访问后12小时内由常规呼吸道气道通关方案在家里收集。样品将放在邮寄的标本杯中，并放在冰上，并带到诊所。如果在访问前无法期待痰液，我们将尝试利用剩余的痰液期望，这些痰液未用于进一步分析和存储。痰液可以根据当前的CFF疗法开发网络标准操作程序收集痰液，如果1）无法预期，（2）患者符合痰诱导的临床标准，（3）临床能够基于当前的痰液进行研究诱导的痰液COVID-19指南，以确保团队成员的安全和足够的PPE供应。

出于安全原因，仅针对符合以下标准的受试者才能执行诱导程序：FEV1≥30％预测，在访问前48小时内没有> 5 ml heasoptysis的病史，能够容忍痰诱导程序。值得注意的是，在预期和诱导的痰液之间进行分析的样品质量几乎没有显着差异。如上所述，要测试的标记。

• 环境真菌暴露问卷。将在完成诊所访问之前进行。全部问卷是Andy Liu博士使用的经过验证的问卷。给定对研究参与者的时间限制，我们使用的是一份针对对本研究感兴趣的问题的改良问卷（例如，与真菌暴露有关）。这尚未得到验证，但可能会在这项试点研究中提供重要信息，以供未来的研究

• 血清收集。通过CTRC的适当无菌技术，经过认证的个人将进行外围静脉抽血。样品将根据研究协议标准标记。上述要测试的标记。

  • 所有痰液样品要存储并保存，以进行潜在的微生物组，真菌菌和转录组分析，评估各种炎症途径独有的基因表达。

样本量估计：研究建议的功率和样本量由于在研究窗口期间被招募到该试验研究的预期符合条件的患者数量而固定。根据初步数据和感染类型的描述定义，研究人员预计，在为期1年的招聘窗口中，他们将能够注册大约10个没有真菌感染的人，10例真菌感染但没有ABPA的患者，没有ABPA。 。主要分析计划的重点是表3中描述的关键等离子体和痰液测量的描述和比较。功率分析提供了可检测的效应大小，当比较对照组（无真菌感染）与非ABPA组或ABPA组时提供了可检测的效果大小。计算基于在Pass版本15统计软件（2）中进行的两面两样本相等差异t检验的80％和I型错误率为0.05的功率（2）。真菌感染组中的小组样本量为10和5，当种群效应大小分别为1.36和1.66时，拒绝零效应大小的零假设实现了80％的功率。因此，该研究以80％的速度供电，以检测均值大于1.66和1.32标准偏差的平均标记差。鉴于文献中有关CF中Th2标记的数据有限，我们将这些计算与我们正在测试的多个TH2标记的平均值偏离。

数据收集和存储：所有受试者都将在研究样本收集时取消识别，并使用主密钥存储。使用PI，只有能够监视和查看数据的基本研究人员将访问此信息。所有硬拷贝源文档将保存在CF研究团队存储设施中的锁定文件柜中。此外，为了进一步确保数据完整性，本研究的数据将存储在研究电子数据捕获系统（REDCAP）中，这将使仅对基本个人的访问有限。 REDCAP启用在线验证以最大程度地减少转录错误并提供数据提交的实时通知，并允许立即进行中央监视和反馈。访问数据需要加密的安全套接字层（SSL）连接，并且更改由用户ID，时间戳和项目记录。数据库经常备份。

• 囊性纤维化
• 真菌感染
• 曲霉病' target='_blank'>过敏性支气管肺曲霉病

• 真菌感染组
  在研究访问之前的18个月中，在> = 2个单独的情况下从痰液和/或BAL培养中分离出一种真菌物种，并且没有诊断为ABPA（n = 10）。
• 控制组
  以前从未从痰液，BAL或OP拭子中分离出真菌（n = 10）。
• ABPA集团

  CFF指南定义的ABPA的先前诊断，无论真菌感染或病史的量如何。

  •ABPA每个CFF的最小诊断标准：急性或亚急性恶化，总血清IgE> 500 IU，每毫升立即对曲霉的皮肤反应性或对烟曲霉的体外IgE抗体，以及未响应的新的或最近的胸部成像变化用于抗生素和标准的物理疗法或对烟曲霉或IgG抗体抗体的抗生素（n = 5）。 ABPA诊断不需要培养阳性痰液，并且不考虑CFF指南的诊断。

纳入标准：

• 根据CFF指南的CF诊断，并在儿童医院（CHCO）CF中心诊断
• 符合仅一个真菌组的标准（如下所述）
• 临床稳定性没有任何变化的急性抗生素方案
• 临床稳定性在过去14天内无需用于急性NSAID或口服类固醇
• 患有与CF相关并与CF无关的其他合并状况的人，包括但不限于与CF相关的糖尿病，CF相关肝病，哮喘等。

排除标准：

• Burkholderia sp的历史。或无结核分枝杆菌
• 诱发痰液治疗或抽血的合并或健康禁忌症

虽然细菌是CF肺部疾病中的主要因素，但在痰液和支气管肺泡灌洗液（BAL）中通常会分离真菌（BAL），但尚未完全了解它们在CF中的作用。 CF中的真菌感染具有广泛的演示，从瞬态检测到持续感染，急性真菌支气管炎，导致肺部加重，对真菌过敏原的敏感性以及过敏性支气管支气管肺化的曲霉病（ABPA）。尽管有CF患者的ABPA诊断和治疗的临床指南，但在CF真菌疾病的各种表现中，几乎没有有关监测，临床护理和抗真菌治疗的指南和建议。此外，没有ABPA的真菌对临床影响知之甚少。虽然CF中的炎症通常被认为是中性粒细胞和巨噬细胞驱动的过程（TH1），但在临床和动物CF研究中，在存在真菌疾病的存在下，嗜酸性粒细胞和过敏性细胞因子（TH2）已被证明升高。研究还表明，肺功能降低（例如，预测一秒钟内强迫呼气量，PPFEV1）在痰中经常进行真菌检测的个体，以及与假单胞菌感染和使用抗菌素的使用相关。与非CF患者相比，患有CF的成年人也更容易出现真菌敏化，并且具有更高的过敏性鼻炎和特应疗法。在我们中心进行的一项回顾性研究中，我们发现与没有真菌感染的儿童相比，患有间歇性或慢性真菌感染的儿童肺功能的下降速度更快，无论ABPA状态如何（请参阅初步数据）。了解真菌感染是否是由过敏性（TH2）炎症过程驱动的，可能会通过采用类固醇和抗真菌疗法来改变治疗方法，而真菌感染的患者更容易地对抗肺功能下降。有限的研究研究了CF患者中对真菌病原体的过敏性敏感性的频率，小儿CF人群中过敏敏化的频率以及CF真菌感染的独特炎症特征和表型，包括痰液和血清。

假设：我们假设与没有真菌感染的儿童相比，患有CF和真菌感染的儿童将升高过敏性炎症概况，并提高对真菌元素的敏感性。

具体目标1：比较患有和ABPA患者的患者和没有真菌感染的患者的TH2炎症。

• 方法：我们将从25例（1）没有ABPA的真菌感染的患者中获得血清和痰样样品，n = 10（定义为前18个月内的两种阳性真菌培养物），（2）无真菌感染，n = 10， （3）ABPA，n = 5，并测量特定的痰液和血清细胞因子测量，以评估Th2和Th1炎症途径。
• 测量的生物标志物：嗜酸性阳离子阳离子蛋白（ECP），白介素-4（IL4），介体5（IL5），介体-10（IL10）（IL10），白介素-13（IL13）和嗜酸性粒细胞计数在血清和put虫中。
• 预期的结果：与没有真菌感染的人相比，没有APBA的真菌感染的个体将具有炎症的Th2标记升高。我们还将与ABPA作为单独的对照组的人进行比较。我们还将测量Th1标记，以作为CF中看到的先前确定的炎症概况的参考，看看那些具有真菌疾病的人是否偏离了TH2驱动的过程。

具体目标2：与没有真菌感染的患者和ABPA的患者相比，研究无ABPA的CF真菌感染患者对真菌元素的过敏性敏感性。

• 方法：我们将测量特定IgE水平对各种物种（曲霉，念珠菌等）的特定IgE水平的总IgE和血清免疫接种测试。确定真菌敏化。我们还将对患者进行有关环境暴露的调查，以探索与过敏敏化的关系。
• 预期的结果：与没有真菌感染的人相比，没有ABPA的真菌感染的个体更可能表现出对真菌元素的过敏性敏感性。

这项研究的结果将有助于表征与CF真菌感染相关的炎症概况，从而有助于理解CF人群中疾病的传染性和过敏性。因此，CF真菌感染的病理生理学和临床特征的贡献将是理解这一独特的难以治疗生物体的管理选择，护理指南和疾病进展的一步。

招聘：我们建议招募25名CF患者8至25岁的患者，他们同意参加这项横断面研究，以研究真菌感染和ABPA的免疫系统特征。我们计划筛选个人参加常规CF诊所，并就他们参与这项研究的兴趣与他们联系。由此，我们将解释意图安排研究访问的概念，假设和程序。

患者选择：在常规诊所就诊时，研究人员或合格的研究协调员将从CF中心的CF中心招募患者。

研究访问：我们计划在临床稳定期间前瞻性地招募25名患有CF的受试者。受试者将进行一次研究诊所就诊，将与他们在CHCO肺诊所设施的诊所访问一致。以下诊断信息将输入案例报告表：人口统计信息，诊断病史和突变，与CF相关的合并症，历史微生物学结果，包括真菌培养结果，包括调节剂治疗和长期抗生素治疗，以前的过敏测试，以前ABPA的诊断标准（如果适用）。我们还将利用病历中的历史临床数据来建立其他合并症，肺功能趋势和基线，其他细菌感染的病史，过敏诊断史以及其他相关的病史和诊断测试（即先前的CT扫描结果，以前的血液工作等）。将进行以下评估：

• 病历中的历史数据。例子包括与CF相关的合并诊断（例如但不限于CF相关糖尿病，CF肝病，哮喘等），先前的血液检查（例如但不限于血清IgE水平，以前灌洗研究，常规和紧急/入院CF实验室等），先前的肺活量计和肺功能数据，先前的营养和生长数据（BMI，维生素水平等），以前的微生物学和培养数据等。
• 从常规CF诊所获得的BMI测量值
• 高度和体重将要获得并随后计算。
• 从常规CF诊所就诊获得的肺功能测试。肺活量测定法将根据美国胸部社会标准进行，而绝对值将通过全球肺功能启动参考方程进行转换为预测的百分比34。
• 痰收集。自发期望的痰液将尽可能使用。该患者将在诊所访问后12小时内由常规呼吸道气道通关方案在家里收集。样品将放在邮寄的标本杯中，并放在冰上，并带到诊所。如果在访问前无法期待痰液，我们将尝试利用剩余的痰液期望，这些痰液未用于进一步分析和存储。痰液可以根据当前的CFF疗法开发网络标准操作程序收集痰液，如果1）无法预期，（2）患者符合痰诱导的临床标准，（3）临床能够基于当前的痰液进行研究诱导的痰液COVID-19指南，以确保团队成员的安全和足够的PPE供应。

出于安全原因，仅针对符合以下标准的受试者才能执行诱导程序：FEV1≥30％预测，在访问前48小时内没有> 5 ml heasoptysis的病史，能够容忍痰诱导程序。值得注意的是，在预期和诱导的痰液之间进行分析的样品质量几乎没有显着差异。如上所述，要测试的标记。

• 环境真菌暴露问卷。将在完成诊所访问之前进行。全部问卷是Andy Liu博士使用的经过验证的问卷。给定对研究参与者的时间限制，我们使用的是一份针对对本研究感兴趣的问题的改良问卷（例如，与真菌暴露有关）。这尚未得到验证，但可能会在这项试点研究中提供重要信息，以供未来的研究

• 血清收集。通过CTRC的适当无菌技术，经过认证的个人将进行外围静脉抽血。样品将根据研究协议标准标记。上述要测试的标记。

  • 所有痰液样品要存储并保存，以进行潜在的微生物组，真菌菌和转录组分析，评估各种炎症途径独有的基因表达。

样本量估计：研究建议的功率和样本量由于在研究窗口期间被招募到该试验研究的预期符合条件的患者数量而固定。根据初步数据和感染类型的描述定义，研究人员预计，在为期1年的招聘窗口中，他们将能够注册大约10个没有真菌感染的人，10例真菌感染但没有ABPA的患者，没有ABPA。 。主要分析计划的重点是表3中描述的关键等离子体和痰液测量的描述和比较。功率分析提供了可检测的效应大小，当比较对照组（无真菌感染）与非ABPA组或ABPA组时提供了可检测的效果大小。计算基于在Pass版本15统计软件（2）中进行的两面两样本相等差异t检验的80％和I型错误率为0.05的功率（2）。真菌感染组中的小组样本量为10和5，当种群效应大小分别为1.36和1.66时，拒绝零效应大小的零假设实现了80％的功率。因此，该研究以80％的速度供电，以检测均值大于1.66和1.32标准偏差的平均标记差。鉴于文献中有关CF中Th2标记的数据有限，我们将这些计算与我们正在测试的多个TH2标记的平均值偏离。

数据收集和存储：所有受试者都将在研究样本收集时取消识别，并使用主密钥存储。使用PI，只有能够监视和查看数据的基本研究人员将访问此信息。所有硬拷贝源文档将保存在CF研究团队存储设施中的锁定文件柜中。此外，为了进一步确保数据完整性，本研究的数据将存储在研究电子数据捕获系统（REDCAP）中，这将使仅对基本个人的访问有限。 REDCAP启用在线验证以最大程度地减少转录错误并提供数据提交的实时通知，并允许立即进行中央监视和反馈。访问数据需要加密的安全套接字层（SSL）连接，并且更改由用户ID，时间戳和项目记录。数据库经常备份。

• 囊性纤维化
• 真菌感染
• 曲霉病' target='_blank'>过敏性支气管肺曲霉病

• 真菌感染组
  在研究访问之前的18个月中，在> = 2个单独的情况下从痰液和/或BAL培养中分离出一种真菌物种，并且没有诊断为ABPA（n = 10）。
• 控制组
  以前从未从痰液，BAL或OP拭子中分离出真菌（n = 10）。
• ABPA集团

  CFF指南定义的ABPA的先前诊断，无论真菌感染或病史的量如何。

  •ABPA每个CFF的最小诊断标准：急性或亚急性恶化，总血清IgE> 500 IU，每毫升立即对曲霉的皮肤反应性或对烟曲霉的体外IgE抗体，以及未响应的新的或最近的胸部成像变化用于抗生素和标准的物理疗法或对烟曲霉或IgG抗体抗体的抗生素（n = 5）。 ABPA诊断不需要培养阳性痰液，并且不考虑CFF指南的诊断。

纳入标准：

• 根据CFF指南的CF诊断，并在儿童医院（CHCO）CF中心诊断
• 符合仅一个真菌组的标准（如下所述）
• 临床稳定性没有任何变化的急性抗生素方案
• 临床稳定性在过去14天内无需用于急性NSAID或口服类固醇
• 患有与CF相关并与CF无关的其他合并状况的人，包括但不限于与CF相关的糖尿病，CF相关肝病，哮喘等。

排除标准：

• Burkholderia sp的历史。或无结核分枝杆菌
• 诱发痰液治疗或抽血的合并或健康禁忌症