目的：Survivin是凋亡蛋白（IAP）家族抑制剂的常见成员，在促进细胞增殖和预防凋亡方面具有双重作用。菲林-3是一种基质糖蛋白，最近作为胸膜间皮瘤' target='_blank'>恶性胸膜间皮瘤的有前途的新型生物标志物。这项研究的目的是验证良性和恶性呼吸道疾病中属蛋白和斐抗蛋白3的表达水平。

患者和方法：该研究包括73例患者，患有各种良性和恶性呼吸道疾病。为了验证数据，选择了一个包括20个健康受试者的对照组。对所包含个体的临床和放射学评估进行了。使用ELISA分析试剂盒测量血清属源和菲林-3水平，而使用Western印迹分析评估其在肺和胸膜中的局部表达。

研究设计和参与者当前的前瞻性队列研究是针对73名男女患者进行的，最近被诊断为良性和恶性呼吸疾病，是从心脏 - 胸膜手术和肿瘤学部门招募的，埃及南谷大学的Qena University Hospitals。包括的患者分为4组。 A组包括21例肺癌患者，B组包括21例患有各种良性肺部疾病的患者，D组包括15例胸膜间皮瘤' target='_blank'>恶性胸膜间皮瘤（MPM）患者，E组包括16例患有各种良性胸膜疾病的患者。此外，20岁和性别不相关的健康受试者是对照组（C组）。排除了肾衰竭，肝衰竭，严重的心肺妥协，凝血病或血液动力学不稳定的患者，该研究得到了医学院伦理学委员会的批准赫尔辛基。已从每个纳入的主题获得了知情书面同意。从2017年1月1日到2019年12月30日，研究期限为两年。

数据收集完整的病史，为每位纳入患者进行彻底的临床检查。此外，进行了普通CXR和CT的放射学评估，以及常规实验室研究（血清乳酸脱氢酶（LDH），总蛋白质，白蛋白，肝和肾功能，ESR和CBC）。指示时，进行了多个肺活检并送去进行组织病理学检查。对于证明胸腔积液的病例，进行了胸腔穿刺。进行了标准的胸膜液分析，包括：pH，胸膜/血清的生化测试（LDH，葡萄糖，白蛋白和腺苷脱氨酶（ADA）（ADA），细胞学和微生物测试（Zn，LJ培养）和差异细胞计数）以及Light的原始标准（胸膜流体/血清蛋白> 0.5的比率，胸膜/血清LDH> 0.6或胸膜流体LDH的比率超过正常血清值上限的三分之二以上，与渗出性胸膜胸膜的渗出率相比。对具有in依性细胞学或胸腔液分析的患者进行了胸腔镜，并进行了多个胸膜活检进行组织病理学检查。如果胸腔液细胞学或胸膜活检结果对恶性肿瘤呈阳性，则诊断出胸腔积液' target='_blank'>恶性胸腔积液。

MPM的分期是使用Van Meerbeeck等人进行的，而肺癌的分期是根据Lim等人的评估。

血液样本和胸腔积液液采集使用血清分离剂凝胶管中抽出五毫升静脉血液，并允许在室温下凝结30分钟，然后在1000g处离心15分钟。将分离的血清使用-800C的1 ml冻管将分离的血清存储在等分试样中，以进行后来的生物化学测定，对属于Survivin和fibulin -3。此外，将10 mL的来自随附患者的胸腔液在1000G处离心15分钟，并使用1 ml的冻管在-800C下存储在等分试样中，以便使用蛋白质印迹分析的Survivin和Fibulin -3表达水平进行后来的分子测定。

使用Chongqing Biospes Co.，Chongqing Biospes Co.，Catalog Number Number编号BYEE3519和BYEK2017分别，使用市售的ELISA分析套件来实现血清Survivin和fibulin-3的ELISA测定法对血清Survivin和fibulin-3的定量测定。根据制造协议，使用微板ELISA读取器（EMR 500，美国EMR 500）进行测定。

在冰冷的RIPA裂解缓冲液（Sigma-Aldrich，Italy，Italy）中均质化了对Survivin和fibulin-3表达水平的蛋白质印迹评估肺和胸膜活检，其中包含1％的蛋白酶抑制剂鸡尾酒（Cell Signal Signaling Technology）美国）使用陶器 - 旋转旋转均匀均匀均匀均匀均匀（玻璃/特氟龙均匀剂），该均匀的晶状体和储存在-70°C下的冷冻，以随后评估通过Western Blotting技术评估组织核Survivin和Fibulin-3表达式。

将每个相应的肺，胸膜组织匀浆或胸腔积液样品在95°C变性5分钟的蛋白质中，然后在2×Laemmli缓冲液中添加5％2- cercapto乙醇。 SDS-PAGE电泳是通过通过解决凝胶在75伏上加载50 µg蛋白质（Survivin的18％，fibulin-3的15％）来实现SDS-PAGE电泳，然后在大约2小时内使用125伏，并使用T-77转移到PVDF膜上ECL半偏转单元（Amersham Biosciences UK LTD）2小时。通过在含有0.1％Tween和5％非脂肪牛奶的TBS缓冲液中孵育PVDF膜，在4°C下孵育1小时，然后在4°C下与兔抗阳离子多克隆抗体（Bioss Inc.，Massachusetts，Massachusetts，在4°C下孵育），进行免疫印迹。 ，美国）和兔抗纤维蛋白-3多克隆抗体（Novus Biologicals，LLC，Littleton，CO，USA），稀释为1：1500。在用TBST缓冲液洗涤3次后，将每个膜在室温下与碱性磷酸酶偶联的山羊抗小鼠二抗（Novus Biologicals，LLC，Littleton，CO，CO）一起孵育1小时，以1：5000的稀释。在TBST中洗涤四次后，用市售的BCIP/NBT底物检测试剂盒（Genemed Biotechnologies，Inc。，CA，USA）检测到膜结合抗体。通过在4°C下以1：5000的稀释度对小鼠单克隆抗β-肌动蛋白抗体（Santa Cruz Biotechnology，CA，CA，Santa Cruz Biotechnology，Inc。），以4°C的剥离和重新塑造每个膜的等效蛋白载荷。重复该分析3次，以确保结果的可重复性。使用ImageJ软件进行定量，并表示为带密度相对于β-肌动蛋白。

使用SPSS版本19（社会科学统计软件包）进行统计分析数据输入和数据分析。数据作为一个数字，百分比，参数数据的平均值和标准偏差表示。卡方检验和Fisher精确测试用于比较定性变量。独立t检验用于比较两组之间的定量变量。进行了皮尔逊相关性以测量定量变量之间的相关性。 MEDCALC计划通过计算AUC（95％CI）来计算灵敏度，特异性，正和阴性预测值。当<0.05时，P值认为P值在统计上具有显着意义。

• A组
  21例肺癌患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• b组
  21例良性肺部疾病的患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• 组c
  健康控制
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• d组
  15例胸膜间皮瘤' target='_blank'>恶性胸膜间皮瘤（MPM）患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• 组
  16例患有各种良性胸腔疾病的患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达

纳入标准：

• 任何患有良性或恶性呼吸道疾病的患者，并同意纳入研究

排除标准：

• 排除了肾衰竭，肝衰竭，严重的心肺折衷，凝血病或血液动力学不稳定的患者

目的：Survivin是凋亡蛋白（IAP）家族抑制剂的常见成员，在促进细胞增殖和预防凋亡方面具有双重作用。菲林-3是一种基质糖蛋白，最近作为胸膜间皮瘤' target='_blank'>恶性胸膜间皮瘤的有前途的新型生物标志物。这项研究的目的是验证良性和恶性呼吸道疾病中属蛋白和斐抗蛋白3的表达水平。

患者和方法：该研究包括73例患者，患有各种良性和恶性呼吸道疾病。为了验证数据，选择了一个包括20个健康受试者的对照组。对所包含个体的临床和放射学评估进行了。使用ELISA分析试剂盒测量血清属源和菲林-3水平，而使用Western印迹分析评估其在肺和胸膜中的局部表达。

研究设计和参与者当前的前瞻性队列研究是针对73名男女患者进行的，最近被诊断为良性和恶性呼吸疾病，是从心脏 - 胸膜手术和肿瘤学部门招募的，埃及南谷大学的Qena University Hospitals。包括的患者分为4组。 A组包括21例肺癌患者，B组包括21例患有各种良性肺部疾病的患者，D组包括15例胸膜间皮瘤' target='_blank'>恶性胸膜间皮瘤（MPM）患者，E组包括16例患有各种良性胸膜疾病的患者。此外，20岁和性别不相关的健康受试者是对照组（C组）。排除了肾衰竭，肝衰竭，严重的心肺妥协，凝血病或血液动力学不稳定的患者，该研究得到了医学院伦理学委员会的批准赫尔辛基。已从每个纳入的主题获得了知情书面同意。从2017年1月1日到2019年12月30日，研究期限为两年。

数据收集完整的病史，为每位纳入患者进行彻底的临床检查。此外，进行了普通CXR和CT的放射学评估，以及常规实验室研究（血清乳酸脱氢酶（LDH），总蛋白质，白蛋白，肝和肾功能，ESR和CBC）。指示时，进行了多个肺活检并送去进行组织病理学检查。对于证明胸腔积液的病例，进行了胸腔穿刺。进行了标准的胸膜液分析，包括：pH，胸膜/血清的生化测试（LDH，葡萄糖，白蛋白和腺苷脱氨酶（ADA）（ADA），细胞学和微生物测试（Zn，LJ培养）和差异细胞计数）以及Light的原始标准（胸膜流体/血清蛋白> 0.5的比率，胸膜/血清LDH> 0.6或胸膜流体LDH的比率超过正常血清值上限的三分之二以上，与渗出性胸膜胸膜的渗出率相比。对具有in依性细胞学或胸腔液分析的患者进行了胸腔镜，并进行了多个胸膜活检进行组织病理学检查。如果胸腔液细胞学或胸膜活检结果对恶性肿瘤呈阳性，则诊断出胸腔积液' target='_blank'>恶性胸腔积液。

MPM的分期是使用Van Meerbeeck等人进行的，而肺癌的分期是根据Lim等人的评估。

血液样本和胸腔积液液采集使用血清分离剂凝胶管中抽出五毫升静脉血液，并允许在室温下凝结30分钟，然后在1000g处离心15分钟。将分离的血清使用-800C的1 ml冻管将分离的血清存储在等分试样中，以进行后来的生物化学测定，对属于Survivin和fibulin -3。此外，将10 mL的来自随附患者的胸腔液在1000G处离心15分钟，并使用1 ml的冻管在-800C下存储在等分试样中，以便使用蛋白质印迹分析的Survivin和Fibulin -3表达水平进行后来的分子测定。

使用Chongqing Biospes Co.，Chongqing Biospes Co.，Catalog Number Number编号BYEE3519和BYEK2017分别，使用市售的ELISA分析套件来实现血清Survivin和fibulin-3的ELISA测定法对血清Survivin和fibulin-3的定量测定。根据制造协议，使用微板ELISA读取器（EMR 500，美国EMR 500）进行测定。

在冰冷的RIPA裂解缓冲液（Sigma-Aldrich，Italy，Italy）中均质化了对Survivin和fibulin-3表达水平的蛋白质印迹评估肺和胸膜活检，其中包含1％的蛋白酶抑制剂鸡尾酒（Cell Signal Signaling Technology）美国）使用陶器 - 旋转旋转均匀均匀均匀均匀均匀（玻璃/特氟龙均匀剂），该均匀的晶状体和储存在-70°C下的冷冻，以随后评估通过Western Blotting技术评估组织核Survivin和Fibulin-3表达式。

将每个相应的肺，胸膜组织匀浆或胸腔积液样品在95°C变性5分钟的蛋白质中，然后在2×Laemmli缓冲液中添加5％2- cercapto乙醇。 SDS-PAGE电泳是通过通过解决凝胶在75伏上加载50 µg蛋白质（Survivin的18％，fibulin-3的15％）来实现SDS-PAGE电泳，然后在大约2小时内使用125伏，并使用T-77转移到PVDF膜上ECL半偏转单元（Amersham Biosciences UK LTD）2小时。通过在含有0.1％Tween和5％非脂肪牛奶的TBS缓冲液中孵育PVDF膜，在4°C下孵育1小时，然后在4°C下与兔抗阳离子多克隆抗体（Bioss Inc.，Massachusetts，Massachusetts，在4°C下孵育），进行免疫印迹。 ，美国）和兔抗纤维蛋白-3多克隆抗体（Novus Biologicals，LLC，Littleton，CO，USA），稀释为1：1500。在用TBST缓冲液洗涤3次后，将每个膜在室温下与碱性磷酸酶偶联的山羊抗小鼠二抗（Novus Biologicals，LLC，Littleton，CO，CO）一起孵育1小时，以1：5000的稀释。在TBST中洗涤四次后，用市售的BCIP/NBT底物检测试剂盒（Genemed Biotechnologies，Inc。，CA，USA）检测到膜结合抗体。通过在4°C下以1：5000的稀释度对小鼠单克隆抗β-肌动蛋白抗体（Santa Cruz Biotechnology，CA，CA，Santa Cruz Biotechnology，Inc。），以4°C的剥离和重新塑造每个膜的等效蛋白载荷。重复该分析3次，以确保结果的可重复性。使用ImageJ软件进行定量，并表示为带密度相对于β-肌动蛋白。

使用SPSS版本19（社会科学统计软件包）进行统计分析数据输入和数据分析。数据作为一个数字，百分比，参数数据的平均值和标准偏差表示。卡方检验和Fisher精确测试用于比较定性变量。独立t检验用于比较两组之间的定量变量。进行了皮尔逊相关性以测量定量变量之间的相关性。 MEDCALC计划通过计算AUC（95％CI）来计算灵敏度，特异性，正和阴性预测值。当<0.05时，P值认为P值在统计上具有显着意义。

• A组
  21例肺癌患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• b组
  21例良性肺部疾病的患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• 组c
  健康控制
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• d组
  15例胸膜间皮瘤' target='_blank'>恶性胸膜间皮瘤（MPM）患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达
• 组
  16例患有各种良性胸腔疾病的患者
  干预：诊断测试：ELISA分析和西部印迹分析Survivin和fibulin-3表达

纳入标准：

• 任何患有良性或恶性呼吸道疾病的患者，并同意纳入研究

排除标准：

• 排除了肾衰竭，肝衰竭，严重的心肺折衷，凝血病或血液动力学不稳定的患者