• 新生体脂肪百分比[时间范围：出生后24小时至48小时。这是给出的
  通过皮肤折叠量获得的体内脂肪百分比，并使用Catalano等人（1996）公式进行计算。
• 婴儿体内脂肪[时间范围：4个月大。这是给出的
  空气位移（PEA POD）获得的百分比和脂肪质量

• 新生儿单核细胞和巨噬细胞体外表观遗传驱动的炎症反应。 [时间范围：出生时]
  分析从新生儿单核细胞获得的DNA中的差异甲基化位点（3组）
• DHA新生儿单核细胞中的抗炎作用[时间范围：出生时]
  体外抗炎DHA对新生儿单核细胞的影响

• 新生儿单核细胞和巨噬细胞体外表观遗传驱动的炎症反应。 [时间范围：出生时]
  分析从新生儿单核细胞获得的DNA中的差异甲基化位点（3组）
• DHA新生儿单核细胞中的抗丰富化作用[时间范围：出生时]
  体外抗炎DHA对新生儿象征的影响

根据《 2009 - 2010年智利国家健康调查》，生殖年龄的60％的妇女超重或肥胖，长期对妇女以及后代的健康有害。

需要进行新的努力来阐明孕产妇的体内脂肪和肥胖是如何上前以及怀孕期间如何影响后代的心脏代谢和肥胖风险。如今，很明显，成年人的肥胖症构成了慢性临界炎症状态，其特征是脂肪组织中单核细胞的浸润增加，以及pro-（M1）增加和抗（M2）炎症性巨噬细胞极化之间的不平衡。在3岁以下的肥胖儿童中发现了炎症标记的增加，但是如果出生时出现这些标记，则完全未知。

因此，揭示与单核细胞分化为促炎巨噬细胞能力的机制将有助于建立早期标志物，这些标志是患有心脏代谢疾病的潜在风险。在这种情况下，M1-M2极化的调节似乎对于改变免疫反应至关重要，并且该过程将受到表观遗传机制的严格调节。

另一方面，长链多不饱和脂肪酸（LCPUFA）是细胞膜成分和修饰剂的前体，以及参与心血管，代谢和免疫功能的大量信号分子的前体。另外，DHA调节单核细胞和巨噬细胞中的基因表达改变了M1/M2极化。 DHA在高风险的寄生肥胖母亲中的补充，患有已知低N-3摄入量的人数将对新生儿和婴儿％体内脂肪产生重要影响。人类怀孕期间N-6/N-3 LCPUFA比率的改善可能代表了恢复胎儿和新生儿高体内脂肪和健康免疫系统成熟的主要预防策略。

该提议的假设是，怀孕期间从肥胖的母亲出生的新生儿显示出肥胖高风险的特定标志物的降低。这些标记将被证明是出生时和4个月大的体内脂肪百分比，以及与DHA摄入量低的肥胖母亲的新生儿相比，出生时新生儿单核细胞的功能和表观遗传变化的恢复。

目标：

在第一次产前访问时（妊娠<14周）（参考组）和妊娠前肥胖症（BMI> 30 kg/m2），从正常BMI（> 18.5和<24,9）出生的新生儿（> 18.5和<24,9）中（习惯）DHA摄入量（200 mg/day）（MO组）和妊娠前肥胖妇女，并补充了高剂量的DHA（800 mg/day）（MO+DHA组），我们将：

• 分析母体DHA补充是否会在4个月大时修饰新生儿和儿童的身体成分。
• 确定怀孕期间用DHA补充孕妇是否会改变母亲在怀孕期间母亲，胎儿，胎盘和儿童4个月大的循环促和抗炎细胞因子和代谢标记的平衡
• 确定巨噬细胞对与肥胖母亲的胎儿单核细胞中促和抗炎性肥胖相关性产生中炎症介质对炎性介质的伴侣的反应，以及DHA母体补充剂是否会恢复这种表型。
• 确定孕产妇肥胖是否转化为胎儿单核细胞中全基因组DNA甲基化特征的变化，以及补充母体DHA对这种表观遗传学作用的影响。

方法。 Epifat研究是通过健康的营养中的孕产妇肥胖控制中的嵌套队列（PI：Garmendia NCT02574767）。可能会研究在妊娠14周之前开始进行产前护理的随机患者，到四个平行研究臂之一：2组接受200 mg/天DHA（基于精神分裂油，100％DHA，DSM）和2组800 mg/天/天DHA，每个小组都有一个与家庭饮食和体育锻炼干预措施的小组。

招聘和随访：入交货前的部门时，SóteroDelRío医院的助产士邀请所有符合资格标准参加这项研究并执行知情同意程序的孕妇。

在Epifat研究中招募后，在分娩时刻，助产士收集脐带血样本和胎盘组织。在24至48小时之间。分娩后，研究助产士参观患者，以对新生儿进行人体测量法，并收集有关女性健康和分娩过程的社会人口统计学数据和临床信息。

在4个月的时间里，婴儿在饮食环境和预防与营养慢性疾病相关的研究中心（CIAPEC的西班牙首字母缩写）中进行了访问，从营养和食品技术研究所（他的西班牙首字母缩写）评估人体测定法和身体成分。在这次访问中，收集了婴儿血液样本（5毫升）和婴儿健康状况信息。此外，进行母体人体测量法，并将婴儿喂养和食物频率调查应用于母亲。

样本量：

为了计算体内脂肪百分比的样本量（主要结果）被认为是由Catalano描述的平均差异2.5％和3.0 SD。考虑到80％的功率，p值为0.05，样本量估计为每组45名受试者。使用软件统计/数据分析STATA版本14.0（美国德克萨斯州）进行计算。考虑到损失的20％跟进样本量，每组将54名受试者调整为54名受试者。

对于次要结果，“在体外，新生儿巨噬细胞的表观遗传驱动的炎症反应”没有任何证据。但是，我们小组的先前研究表明：对于IL-1β启动子中的甲基化百分比，正常体重和肥胖母亲的每组15个新生儿的样本量足以在两组之间找到统计差异，而对于IL -10在源自新生儿单核细胞的巨噬细胞中，每组需要10名受试者。因此，对于这些结果，每组被认为是15个受试者的样本量。

该研究的新生儿和产妇变量。

研究中包含的变量是：

• 新生儿/婴儿的变量：新生儿巨噬细胞中体内脂肪和表观遗传驱动的炎症反应的百分比。
• 母亲在怀孕期间的自变量（怀孕的第14周和24-28周）：孕妇（年），BMI（kg/m2，分类），体重（kg），身高（M），胎龄（周年 +天） ，IL-6，IL-1β，TNFα，MCP-1，IL-10（PG/ML），甘油三酸酯，胆固醇，LDL-胆固醇，VLDL，HDL（全部为mg/dl），禁食Glycaemia（mg/dl）（mg/dl）和胰岛素（pg/mL），HOMA-IR，脂联素（UG/mL），血浆DHA（μmol/L）的水平。
• 出生时母亲的自变量：妊娠体重增加（kg，分类），分娩类型，劳动时间。
• 新生儿的自变量：性别，年龄（出生时，生后周），体重（G），长度（CM），头围（CM），洪巴尔指数（kg/m3），胎龄（分类），分类（分类）， IL-6，IL-1β，TNFα，MCP-1，IL-10（pg/ml），血浆DHA（μmol/L）的水平，skinfolds（mm）（二头肌，三头肌，肩cap骨，肩cap骨，suprailiac和tigr）。
• 其他母亲变量：均等，吸烟习惯，教育（年），分娩类型，胎盘体重（G）。

离体和体外研究脐带血。分娩后和在Terumo血液收集袋（40-100毫升）中置入胎盘之前收集脐带血，并在4°C下储存直至加工（在分娩后1-5小时内）。

孕产妇和胎儿血液中的DHA水平：将通过GASS色谱研究来测量这些水平。

单核细胞分离，细胞培养和巨噬细胞分化。外周血单核细胞（PBMC）通过Ficoll密度梯度在出生后不久分离，使用Histopaque-1077（Sigma-Aldrich，Missouri，US）离心，并在RPMI 1640培养基（Sigma-Aldrich，US）中孵育在5％CO2的100 mM培养皿中，在37°C下2小时，在100 mM培养皿中进行8至10×106的细胞/mL。单核细胞身份通过流式细胞仪评估。单核细胞培养7天，以评估巨噬细胞分化。巨噬细胞极化是通过暴露24小时至100 ng/ml的LP（Sigmaaldrich，Missouri，US）和20 ng/ml的INFγ（R＆D Systems，Minneapolis，US）的M1或M1或20 ng/ml的20 ng/ml IL-4（R＆D Systems，Minneapolis，US，US）的M2在RPMI培养基中补充了5％FBS。

将细胞播种在塑料培养皿中，并保持在受控大气中的孵化器，在37°C下，具有不同的实验条件。

在母体，新生儿和婴儿血浆中定量促疾病和抗炎细胞因子，胰岛素，瘦素和脂联素。

使用多重（Bio-Plex平台）免疫测定法（Milliplex XMAP XMAP高灵敏度人类细胞因子面板以及人类代谢面板，Millipore，Millipore，Billerica，MA，MA），使用多重（Bio-Plex平台）的免疫测定法对这些亲和抗炎介质，瘦素和胰岛素进行定量。根据制造商的说明，用高分子量和总脂联素（Alpco）ELISA试剂盒对脐带等离子体中的总脂联素进行定量。

制备胎盘匀浆。胎盘在分娩时收集并在修剪绳子和膜后进行称重，并在分娩后立即放在冰上。去除了绒毛膜板，羊膜囊和Decidua。将大约50 g的绒毛组织切成小块，并用冰冷的生理盐水冲洗。组织将放在冰冷的缓冲液D [250毫米蔗糖，0.7μmpepstatin a，1.6μm抗蛋白酶，80μm的蛋白蛋白，1毫米EDTA，10 mm HEPES-TRIS（pH 7.4）]下，在4°C下进行，并在冰上均匀使用多龙。匀浆在液氮中被固定在-80°C下，直至分析或进一步加工。

定量PCR用于细胞因子的体外表达。根据制造商指示，使用商业试剂盒（Genelute，Sigma）从单核细胞中分离RNA。 RT是通过即兴-II反向执行的。

转录系统（Promega）。使用人类TNFα，IL-6，IL-1β，MCP-1和IL-10的寡核苷酸引物进行PCR。 GADPH，ATP5F1和RPLP2的mRNA水平用作内部参考。引物已验证以供使用：检查放大，引物浓度，效率引物HK和HK在实验条件下的稳定性。使用2-Delta Delta CT方法计算靶基因的相对表达。

单核细胞的流式细胞仪。使用流式细胞仪评估不同表面标记的表达，该流式细胞仪是在全血中进行的，以鉴定单核细胞亚型或体外分化巨噬细胞，以鉴定免疫表型。在循环单核细胞（CD86+细胞）中，经典和非经典亚型根据CD14和CD16的表面表达进行评估。

根据特定标记的表达（例如CCR2，CXCL13，CX3CR，CD62L，KLF4，TNFα，TNFα，无生产）评估巨噬细胞的免疫表型（IE M1和M2）。样品在实验室中染色，并在48小时内发送到智利大学（Cyantm ADP分析仪（BeckmanCoulter®）的流式细胞仪设施。

全球DNA甲基团。 DNA甲基分析是通过使用Illumina的Infinium甲基化Epic Beadchip Kit与Southampton的Graham Burdge博士和Karen Lillycrop博士合作进行的。

DNA甲基化分析。将使用Bisulfite确定启动子区域的DNA甲基化状态（大约400 bp，来自转录起始位点的400 bp）基因编码的基因，IL-6，IL-6，IL-6，IL-1β，MCP-1，IL-10，PPARγ和PCG1α和PCG1α修饰与DNA测序结合。简而言之，来自细胞中的总DNA提取物将用Biumphite钠将非甲基化的胞嘧啶转化为uracil，并根据我们组使用并发布的策略来通过PCR进行启动子区域。简而言之，将设计一种PCR引物，其中包括一个5'-Biotin标签，该标签将直接从PCR混合物中纯化扩增子。然后，含有生物素的放大DNA链将转移到Pyromark Q96 MD pyrosequencer（Qiagen）进行测序。比较非二硫酸敏感的CpG（保守的C，甲基化的CpG）和亚硫酸盐敏感的CpG（转化的C→T，未甲基化的CPG）的信号强度（未甲基化的CpG），将确定位点特异性CPG甲基化。

统计分析。对于描述性统计，将用于定量变量的平均值±SD或中位数和四分位间范围，以及类别为n的百分比。分布将通过Shapiro Wilk测试进行验证。脂肪质量和循环标记的差异将由ANOVA或KRUSKAL WALLIS根据数据分布确定。 Spearman（参数）或Pearson（无参数）相关性将应用于确定因与独立（母体和新生儿）变量之间的关联。独立变量将适用于逻辑和线性回归模型，以评估相互作用以及确定混杂因素。对于体外研究，将分别通过学生的未配对t检验和方差分析（ANOVA）进行两个或多个组之间的比较。如果方差分析显示变量之间存在显着的相互作用，则在比较选定的组和多比较的Bonferroni校正测试时，通过DUNN进行了事后分析。体外反应对细胞因子的数据将适合剂量反应曲线，从中，将获得最大的反应和药物效力（PD2 = -LOG EC50）。在不同条件下的曲线和最大响应的比较将由方差分析分析。所有分析将使用统计软件GraphPad Prism，Stata或SPSS进行，以p <0.05为统计显着性。

• 身体构成
• 肥胖

• 参照组
  在第一次产前访问中，健康期（> 37周的妊娠）新生儿≥18,5≥18,5和<24,9。
• 孕产妇肥胖（MO）组
  孕妇的新生儿接受了200 mg/daydha的妇女≥30。
  干预：饮食补充剂：DHA
• MO+DHA组
  来自孕妇BMI≥30的女性的新生儿接受了800 mg/天DHA的补充。
  干预：饮食补充剂：DHA

纳入标准：

• 健康期限（妊娠37周）的新生儿：前BMI≥18,5和<24,9的妇女在第一次产前访问中（参考组）；孕妇BMI≥30的妇女的新生儿，习惯补充DHA（200 mg/day）（孕产妇肥胖，MO组）；来自孕妇BMI≥30的女性的新生儿，补充了800 mg/天DHA（MO+DHA组）；所有人都有辛格尔顿和健康的怀孕。

排除标准：

• 出生体重低（<2500 g），分娩并发症或需要长期入院的新生儿。
• 患有糖尿病，早产，妊娠糖尿病，先兆子痫，多重妊娠，慢性心脏呼吸障碍或神经系统O遗传缺陷的妇女的新生儿；根据国家准则，任何高风险怀孕状况，

• 新生体脂肪百分比[时间范围：出生后24小时至48小时。这是给出的
  通过皮肤折叠量获得的体内脂肪百分比，并使用Catalano等人（1996）公式进行计算。
• 婴儿体内脂肪[时间范围：4个月大。这是给出的
  空气位移（PEA POD）获得的百分比和脂肪质量

• 新生儿单核细胞和巨噬细胞体外表观遗传驱动的炎症反应。 [时间范围：出生时]
  分析从新生儿单核细胞获得的DNA中的差异甲基化位点（3组）
• DHA新生儿单核细胞中的抗炎作用[时间范围：出生时]
  体外抗炎DHA对新生儿单核细胞的影响

• 新生儿单核细胞和巨噬细胞体外表观遗传驱动的炎症反应。 [时间范围：出生时]
  分析从新生儿单核细胞获得的DNA中的差异甲基化位点（3组）
• DHA新生儿单核细胞中的抗丰富化作用[时间范围：出生时]
  体外抗炎DHA对新生儿象征的影响

根据《 2009 - 2010年智利国家健康调查》，生殖年龄的60％的妇女超重或肥胖，长期对妇女以及后代的健康有害。

需要进行新的努力来阐明孕产妇的体内脂肪和肥胖是如何上前以及怀孕期间如何影响后代的心脏代谢和肥胖风险。如今，很明显，成年人的肥胖症' target='_blank'>肥胖症构成了慢性临界炎症状态，其特征是脂肪组织中单核细胞的浸润增加，以及pro-（M1）增加和抗（M2）炎症性巨噬细胞极化之间的不平衡。在3岁以下的肥胖儿童中发现了炎症标记的增加，但是如果出生时出现这些标记，则完全未知。

因此，揭示与单核细胞分化为促炎巨噬细胞能力的机制将有助于建立早期标志物，这些标志是患有心脏代谢疾病的潜在风险。在这种情况下，M1-M2极化的调节似乎对于改变免疫反应至关重要，并且该过程将受到表观遗传机制的严格调节。

另一方面，长链多不饱和脂肪酸（LCPUFA）是细胞膜成分和修饰剂的前体，以及参与心血管，代谢和免疫功能的大量信号分子的前体。另外，DHA调节单核细胞和巨噬细胞中的基因表达改变了M1/M2极化。 DHA在高风险的寄生肥胖母亲中的补充，患有已知低N-3摄入量的人数将对新生儿和婴儿％体内脂肪产生重要影响。人类怀孕期间N-6/N-3 LCPUFA比率的改善可能代表了恢复胎儿和新生儿高体内脂肪和健康免疫系统成熟的主要预防策略。

该提议的假设是，怀孕期间从肥胖的母亲出生的新生儿显示出肥胖高风险的特定标志物的降低。这些标记将被证明是出生时和4个月大的体内脂肪百分比，以及与DHA摄入量低的肥胖母亲的新生儿相比，出生时新生儿单核细胞的功能和表观遗传变化的恢复。

目标：

在第一次产前访问时（妊娠<14周）（参考组）和妊娠前肥胖症' target='_blank'>肥胖症（BMI> 30 kg/m2），从正常BMI（> 18.5和<24,9）出生的新生儿（> 18.5和<24,9）中（习惯）DHA摄入量（200 mg/day）（MO组）和妊娠前肥胖妇女，并补充了高剂量的DHA（800 mg/day）（MO+DHA组），我们将：

• 分析母体DHA补充是否会在4个月大时修饰新生儿和儿童的身体成分。
• 确定怀孕期间用DHA补充孕妇是否会改变母亲在怀孕期间母亲，胎儿，胎盘和儿童4个月大的循环促和抗炎细胞因子和代谢标记的平衡
• 确定巨噬细胞对与肥胖母亲的胎儿单核细胞中促和抗炎性肥胖相关性产生中炎症介质对炎性介质的伴侣的反应，以及DHA母体补充剂是否会恢复这种表型。
• 确定孕产妇肥胖是否转化为胎儿单核细胞中全基因组DNA甲基化特征的变化，以及补充母体DHA对这种表观遗传学作用的影响。

方法。 Epifat研究是通过健康的营养中的孕产妇肥胖控制中的嵌套队列（PI：Garmendia NCT02574767）。可能会研究在妊娠14周之前开始进行产前护理的随机患者，到四个平行研究臂之一：2组接受200 mg/天DHA（基于精神分裂油，100％DHA，DSM）和2组800 mg/天/天DHA，每个小组都有一个与家庭饮食和体育锻炼干预措施的小组。

招聘和随访：入交货前的部门时，SóteroDelRío医院的助产士邀请所有符合资格标准参加这项研究并执行知情同意程序的孕妇。

在Epifat研究中招募后，在分娩时刻，助产士收集脐带血样本和胎盘组织。在24至48小时之间。分娩后，研究助产士参观患者，以对新生儿进行人体测量法，并收集有关女性健康和分娩过程的社会人口统计学数据和临床信息。

在4个月的时间里，婴儿在饮食环境和预防与营养慢性疾病相关的研究中心（CIAPEC的西班牙首字母缩写）中进行了访问，从营养和食品技术研究所（他的西班牙首字母缩写）评估人体测定法和身体成分。在这次访问中，收集了婴儿血液样本（5毫升）和婴儿健康状况信息。此外，进行母体人体测量法，并将婴儿喂养和食物频率调查应用于母亲。

样本量：

为了计算体内脂肪百分比的样本量（主要结果）被认为是由Catalano描述的平均差异2.5％和3.0 SD。考虑到80％的功率，p值为0.05，样本量估计为每组45名受试者。使用软件统计/数据分析STATA版本14.0（美国德克萨斯州）进行计算。考虑到损失的20％跟进样本量，每组将54名受试者调整为54名受试者。

对于次要结果，“在体外，新生儿巨噬细胞的表观遗传驱动的炎症反应”没有任何证据。但是，我们小组的先前研究表明：对于IL-1β启动子中的甲基化百分比，正常体重和肥胖母亲的每组15个新生儿的样本量足以在两组之间找到统计差异，而对于IL -10在源自新生儿单核细胞的巨噬细胞中，每组需要10名受试者。因此，对于这些结果，每组被认为是15个受试者的样本量。

该研究的新生儿和产妇变量。

研究中包含的变量是：

• 新生儿/婴儿的变量：新生儿巨噬细胞中体内脂肪和表观遗传驱动的炎症反应的百分比。
• 母亲在怀孕期间的自变量（怀孕的第14周和24-28周）：孕妇（年），BMI（kg/m2，分类），体重（kg），身高（M），胎龄（周年 +天） ，IL-6，IL-1β，TNFα，MCP-1，IL-10（PG/ML），甘油三酸酯，胆固醇，LDL-胆固醇，VLDL，HDL（全部为mg/dl），禁食Glycaemia（mg/dl）（mg/dl）和胰岛素（pg/mL），HOMA-IR，脂联素（UG/mL），血浆DHA（μmol/L）的水平。
• 出生时母亲的自变量：妊娠体重增加（kg，分类），分娩类型，劳动时间。
• 新生儿的自变量：性别，年龄（出生时，生后周），体重（G），长度（CM），头围（CM），洪巴尔指数（kg/m3），胎龄（分类），分类（分类）， IL-6，IL-1β，TNFα，MCP-1，IL-10（pg/ml），血浆DHA（μmol/L）的水平，skinfolds（mm）（二头肌，三头肌，肩cap骨，肩cap骨，suprailiac和tigr）。
• 其他母亲变量：均等，吸烟习惯，教育（年），分娩类型，胎盘体重（G）。

离体和体外研究脐带血。分娩后和在Terumo血液收集袋（40-100毫升）中置入胎盘之前收集脐带血，并在4°C下储存直至加工（在分娩后1-5小时内）。

孕产妇和胎儿血液中的DHA水平：将通过GASS色谱研究来测量这些水平。

单核细胞分离，细胞培养和巨噬细胞分化。外周血单核细胞（PBMC）通过Ficoll密度梯度在出生后不久分离，使用Histopaque-1077（Sigma-Aldrich，Missouri，US）离心，并在RPMI 1640培养基（Sigma-Aldrich，US）中孵育在5％CO2的100 mM培养皿中，在37°C下2小时，在100 mM培养皿中进行8至10×106的细胞/mL。单核细胞身份通过流式细胞仪评估。单核细胞培养7天，以评估巨噬细胞分化。巨噬细胞极化是通过暴露24小时至100 ng/ml的LP（Sigmaaldrich，Missouri，US）和20 ng/ml的INFγ（R＆D Systems，Minneapolis，US）的M1或M1或20 ng/ml的20 ng/ml IL-4（R＆D Systems，Minneapolis，US，US）的M2在RPMI培养基中补充了5％FBS。

将细胞播种在塑料培养皿中，并保持在受控大气中的孵化器，在37°C下，具有不同的实验条件。

在母体，新生儿和婴儿血浆中定量促疾病和抗炎细胞因子，胰岛素，瘦素和脂联素。

使用多重（Bio-Plex平台）免疫测定法（Milliplex XMAP XMAP高灵敏度人类细胞因子面板以及人类代谢面板，Millipore，Millipore，Billerica，MA，MA），使用多重（Bio-Plex平台）的免疫测定法对这些亲和抗炎介质，瘦素和胰岛素进行定量。根据制造商的说明，用高分子量和总脂联素（Alpco）ELISA试剂盒对脐带等离子体中的总脂联素进行定量。

制备胎盘匀浆。胎盘在分娩时收集并在修剪绳子和膜后进行称重，并在分娩后立即放在冰上。去除了绒毛膜板，羊膜囊和Decidua。将大约50 g的绒毛组织切成小块，并用冰冷的生理盐水冲洗。组织将放在冰冷的缓冲液D [250毫米蔗糖，0.7μmpepstatin a，1.6μm抗蛋白酶，80μm的蛋白蛋白，1毫米EDTA，10 mm HEPES-TRIS（pH 7.4）]下，在4°C下进行，并在冰上均匀使用多龙。匀浆在液氮中被固定在-80°C下，直至分析或进一步加工。

定量PCR用于细胞因子的体外表达。根据制造商指示，使用商业试剂盒（Genelute，Sigma）从单核细胞中分离RNA。 RT是通过即兴-II反向执行的。

转录系统（Promega）。使用人类TNFα，IL-6，IL-1β，MCP-1和IL-10的寡核苷酸引物进行PCR。 GADPH，ATP5F1和RPLP2的mRNA水平用作内部参考。引物已验证以供使用：检查放大，引物浓度，效率引物HK和HK在实验条件下的稳定性。使用2-Delta Delta CT方法计算靶基因的相对表达。

单核细胞的流式细胞仪。使用流式细胞仪评估不同表面标记的表达，该流式细胞仪是在全血中进行的，以鉴定单核细胞亚型或体外分化巨噬细胞，以鉴定免疫表型。在循环单核细胞（CD86+细胞）中，经典和非经典亚型根据CD14和CD16的表面表达进行评估。

根据特定标记的表达（例如CCR2，CXCL13，CX3CR，CD62L，KLF4，TNFα，TNFα，无生产）评估巨噬细胞的免疫表型（IE M1和M2）。样品在实验室中染色，并在48小时内发送到智利大学（Cyantm ADP分析仪（BeckmanCoulter®）的流式细胞仪设施。

全球DNA甲基团。 DNA甲基分析是通过使用Illumina的Infinium甲基化Epic Beadchip Kit与Southampton的Graham Burdge博士和Karen Lillycrop博士合作进行的。

DNA甲基化分析。将使用Bisulfite确定启动子区域的DNA甲基化状态（大约400 bp，来自转录起始位点的400 bp）基因编码的基因，IL-6，IL-6，IL-6，IL-1β，MCP-1，IL-10，PPARγ和PCG1α和PCG1α修饰与DNA测序结合。简而言之，来自细胞中的总DNA提取物将用Biumphite钠将非甲基化的胞嘧啶转化为uracil，并根据我们组使用并发布的策略来通过PCR进行启动子区域。简而言之，将设计一种PCR引物，其中包括一个5'-Biotin标签，该标签将直接从PCR混合物中纯化扩增子。然后，含有生物素的放大DNA链将转移到Pyromark Q96 MD pyrosequencer（Qiagen）进行测序。比较非二硫酸敏感的CpG（保守的C，甲基化的CpG）和亚硫酸盐敏感的CpG（转化的C→T，未甲基化的CPG）的信号强度（未甲基化的CpG），将确定位点特异性CPG甲基化。

统计分析。对于描述性统计，将用于定量变量的平均值±SD或中位数和四分位间范围，以及类别为n的百分比。分布将通过Shapiro Wilk测试进行验证。脂肪质量和循环标记的差异将由ANOVA或KRUSKAL WALLIS根据数据分布确定。 Spearman（参数）或Pearson（无参数）相关性将应用于确定因与独立（母体和新生儿）变量之间的关联。独立变量将适用于逻辑和线性回归模型，以评估相互作用以及确定混杂因素。对于体外研究，将分别通过学生的未配对t检验和方差分析（ANOVA）进行两个或多个组之间的比较。如果方差分析显示变量之间存在显着的相互作用，则在比较选定的组和多比较的Bonferroni校正测试时，通过DUNN进行了事后分析。体外反应对细胞因子的数据将适合剂量反应曲线，从中，将获得最大的反应和药物效力（PD2 = -LOG EC50）。在不同条件下的曲线和最大响应的比较将由方差分析分析。所有分析将使用统计软件GraphPad Prism，Stata或SPSS进行，以p <0.05为统计显着性。

• 身体构成
• 肥胖

• 参照组
  在第一次产前访问中，健康期（> 37周的妊娠）新生儿≥18,5≥18,5和<24,9。
• 孕产妇肥胖（MO）组
  孕妇的新生儿接受了200 mg/daydha的妇女≥30。
  干预：饮食补充剂：DHA
• MO+DHA组
  来自孕妇BMI≥30的女性的新生儿接受了800 mg/天DHA的补充。
  干预：饮食补充剂：DHA

纳入标准：

• 健康期限（妊娠37周）的新生儿：前BMI≥18,5和<24,9的妇女在第一次产前访问中（参考组）；孕妇BMI≥30的妇女的新生儿，习惯补充DHA（200 mg/day）（孕产妇肥胖，MO组）；来自孕妇BMI≥30的女性的新生儿，补充了800 mg/天DHA（MO+DHA组）；所有人都有辛格尔顿和健康的怀孕。

排除标准：

• 出生体重低（<2500 g），分娩并发症或需要长期入院的新生儿。
• 患有糖尿病，早产，妊娠糖尿病，先兆子痫，多重妊娠，慢性心脏呼吸障碍或神经系统O遗传缺陷的妇女的新生儿；根据国家准则，任何高风险怀孕状况，