背景：在已发表的研究中，仅25-30％的局部晚期食管癌患者发生了对化学放疗的完全反应（CR）。假定液氮喷雾冷冻疗法（LNSC）以刺激抗肿瘤免疫反应。在一项初步研究中，研究人员记录了CR速率为56％，在化学放疗之前进行了一次LNSC。在进行更大的试验以证实这些发现之前，必须确定新辅助LNSC的最大耐受剂量（MTD）。这项研究的目的是：（1）确定在局部晚期食管癌中新辅助化疗期间LNSC的安全性和MTD。 （2）评估LNSC是否导致免疫原性死亡。 （3）评估使用LNSC的肿瘤微环境的变化。

方法：符合条件的成年患者患有局部晚期食道癌的患者将在以下剂量频率下接受LNSC：患者1、2和3：2 LNSC在化学化之前（ChemoxRT）；患者4、5和6：2疗程在ChemoxRT之前LNSC，然后在Chemoxrt的第4周期间进行1个疗程；患者在ChemoxRT之前的7、8和9：2 LNSC，然后在ChemoxRT第4周期间第2周和1个疗程中进行1个疗程。如果未发生剂量限制毒性（DLT），研究人员将招募另外3例患者以确认MTD。研究人员将在48小时和1周的后期与患者联系以评估不良事件（AES）和DLTS，并使用Mellow-Pinkas和Eortc QLQ-OES18评估吞咽困难和生活质量（QOL）的改善（QOL）乐器分别。研究人员将在LNSC的第二届会议之前，在LNSC的第一届会议之前，以及化学疗法完成后，将在肿瘤中获得ELISA和活检的外围血液，以评估肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和T细胞亚型。

预期结果：（1）剂量限制毒性（DLT）不会在患者接受ChemoxRT之前接受2次LNSC疗程，而在ChemoxRT期间进行了2次疗程（2）LNSC会导致免疫原性死亡，如通过血清中HMGB1的升高评估活检标本（CRT）（3）LNSC中的钙网蛋白与T细胞浸润和激活的增加有关（TILS，CD8+，CD3+ T细胞和颗粒酶B）以及调节性T细胞的降低（CD45R0，FOXP3）。

LNSC的管理如下：最多三个循环为20至40秒，每个周期针对肿瘤的最笨重方面。在每个循环中，针对大约2至3 cm2的表面积。每次会议期间最多处理三个站点。通过在重新治疗之前等待至少60秒，并观察到组织的基线颜色并在再灌注后完全消失，通过等待60秒来验证组织解冻。手术完成后，将在恢复单元中监测患者至少30分钟。如果患者符合内窥镜单位的标准排放标准，则将在监测后出院。

冷冻疗法剂量频率间隔

1. 两次LNSC会话（患者1、2和3）：以2周的间隔进行2个LNSC会话，然后同时进行化学放疗5周。
2. 三个LNSC课程（患者4、5和6）：以2周的间隔进行2次LNSC会话，然后同时进行化学放疗5周。在化学放疗的第4周期间，他们将获得LNSC的会议。

3. 四个LNSC课程（患者7、8和9）：以2周的间隔进行2次LNSC，然后并进行化学辐射5周。在化学放疗的第2周和第4周期间，它们将接受LNSC（即化学放疗期间2个会话）。

   • 没有DLT：如果没有患者发展DLT，则研究人员将招募3名患者接受4个LNSC课程，如前所述，以确认安全性。
   • 1个DLT：如果3例患者中有1名DLT患有DLT，则研究人员将招募3名患者接受该剂量的LNSC。如果其他任何已入学的患者发展为DLT，则研究人员将在先前剂量下注册3例患者，以确认较低剂量频率的安全性。
   • 2个DLT：在给定剂量频率间隔，如果3例患者中有2例出现DLT，则研究人员将在先前剂量下注册3名患者，以确认较低剂量频率的安全性。

不良事件（AES）和剂量限制毒性（DLT）的定义，我们将根据美国胃肠道内窥镜学会（ASGE）词典（附录2）定义不良AES。 AE与LNSC的关系将使用以下四个类别进行分类：绝对相关，可能相关，不太可能相关，并且绝对没有相关。 DLT将定义为绝对或可能与冷冻疗法程序有关的任何严重或致命的不良事件（即 - 计划外入院> 10晚，重症监护病房入院> 1晚，患有不良事件的手术，由于不利而导致永久性残疾事件或死亡）。研究小组的成员将在手术后48小时与患者联系，并在评估轻度，中度和严重不良事件（AES）后1周进行检查。除了记录任何AE外，研究协调员还将与医生研究者联系，如果有任何AE报告以指导适当的临床管理。独立的数据安全监控（DSM）委员会将在研究期间每3个月审查AES，以确定AE是否绝对或可能与LNSC程序有关。此外，如果报告了严重的不良事件（SAE），则DSM将在一周内相遇，以确定SAE是否代表DLT。

研究人员将在第一次和第二次冷冻疗法之前以及化学化结束时立即获得组织形态，流式细胞仪和免疫组织化学（IHC）。研究人员将从中心获得一半的活检，而从肿瘤周围获得了一半的活检。如果患者在没有内窥镜检查的化学放疗后直接进行手术，则研究人员将从外植体标本中获得档案组织。研究人员将在4％多聚甲醛（PFA）中放置2个活检，进行TILS分析（1个中心和1个外围），4％PFA中的2个活检进行IHC分析（1个中心和1个外围），2个活检和2个活检进行探索性分析/备份。为了评估免疫原性死亡的证据，研究人员将对CRT的活检标本进行IHC，而ELISA对HMBG1的外周血进行了ELISA。病理学家对患者人口统计的看法不视而不见，治疗分配将使用标准标准和稀疏，中度或明显的TIL评分总体炎症。为了评估免疫浸润，研究人员将构建组织微阵列（TMA）阻滞并在自动免疫染色器中分析针对以下抗原的抗体：CD3，CD8，CD45R0/FOXP3和PAN-CK。

其他数据收集基线变量：基线变量将包括年龄，性别，种族，肿瘤组织学和TNM阶段，肿瘤的位置和长度，存在或不存在关键器官入侵（即 - 主动脉，气管，心脏和椎体），ECOG绩效状态，基线醇酸 - 斑点刺激性评分以及食管癌的生活质量的验证量度，EORTC QLQ-OES18。

病理/临床完整反应的评估：在新辅助化学放疗完成后，重新阶段的PET-CT和手术外植体的结果将被抽象为记录存在或不存在病理完全反应。根据我们机构的标准方案，不进行手术的患者将与活检以及PET-CT一起进行上内窥镜检查，以评估存在或不存在临床完全反应。

评估抑制功效：研究团队的成员将在每次LNSC程序后的1周与每个患者联系，以更新柔毛刺激性吞咽困难分数和EORTC QLQ-OES18。研究人员还将记录是否需要在化学放疗期间使用食管支架，肠内喂养管或肠胃外营养支持。

纳入标准：

患有局部晚期食管癌的成年患者将有资格参加该研究。符合条件的患者必须对食管腺癌，食管鳞状细胞癌，腺鳞癌或胃食管连接腺癌的组织学诊断。局部晚期食管癌将被定义为在正电子发射断层扫描（PET-CT）和IIA至IIIC的TNM阶段上没有远处转移，这是由内窥镜超声和PET-CT所定义的。

排除标准：

1. 小儿患者（年龄小于18岁）
2. 浅表食管癌
3. 无法将胃胃解压缩管传递到胃中
4. 凝血病（INR> 2或血小板计数<50,000/立方毫米）。
5. 无法提供知情同意
6. 东部合作肿瘤学组（ECOG）绩效状态≥3
7. 怀孕

背景：在已发表的研究中，仅25-30％的局部晚期食管癌患者发生了对化学放疗的完全反应（CR）。假定液氮喷雾冷冻疗法（LNSC）以刺激抗肿瘤免疫反应。在一项初步研究中，研究人员记录了CR速率为56％，在化学放疗之前进行了一次LNSC。在进行更大的试验以证实这些发现之前，必须确定新辅助LNSC的最大耐受剂量（MTD）。这项研究的目的是：（1）确定在局部晚期食管癌中新辅助化疗期间LNSC的安全性和MTD。 （2）评估LNSC是否导致免疫原性死亡。 （3）评估使用LNSC的肿瘤微环境的变化。

方法：符合条件的成年患者患有局部晚期食道癌的患者将在以下剂量频率下接受LNSC：患者1、2和3：2 LNSC在化学化之前（ChemoxRT）；患者4、5和6：2疗程在ChemoxRT之前LNSC，然后在Chemoxrt的第4周期间进行1个疗程；患者在ChemoxRT之前的7、8和9：2 LNSC，然后在ChemoxRT第4周期间第2周和1个疗程中进行1个疗程。如果未发生剂量限制毒性（DLT），研究人员将招募另外3例患者以确认MTD。研究人员将在48小时和1周的后期与患者联系以评估不良事件（AES）和DLTS，并使用Mellow-Pinkas和Eortc QLQ-OES18评估吞咽困难和生活质量（QOL）的改善（QOL）乐器分别。研究人员将在LNSC的第二届会议之前，在LNSC的第一届会议之前，以及化学疗法完成后，将在肿瘤中获得ELISA和活检的外围血液，以评估肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和T细胞亚型。

预期结果：（1）剂量限制毒性（DLT）不会在患者接受ChemoxRT之前接受2次LNSC疗程，而在ChemoxRT期间进行了2次疗程（2）LNSC会导致免疫原性死亡，如通过血清中HMGB1的升高评估活检标本（CRT）（3）LNSC中的钙网蛋白与T细胞浸润和激活的增加有关（TILS，CD8+，CD3+ T细胞和颗粒酶B）以及调节性T细胞的降低（CD45R0，FOXP3）。

LNSC的管理如下：最多三个循环为20至40秒，每个周期针对肿瘤的最笨重方面。在每个循环中，针对大约2至3 cm2的表面积。每次会议期间最多处理三个站点。通过在重新治疗之前等待至少60秒，并观察到组织的基线颜色并在再灌注后完全消失，通过等待60秒来验证组织解冻。手术完成后，将在恢复单元中监测患者至少30分钟。如果患者符合内窥镜单位的标准排放标准，则将在监测后出院。

冷冻疗法剂量频率间隔

1. 两次LNSC会话（患者1、2和3）：以2周的间隔进行2个LNSC会话，然后同时进行化学放疗5周。
2. 三个LNSC课程（患者4、5和6）：以2周的间隔进行2次LNSC会话，然后同时进行化学放疗5周。在化学放疗的第4周期间，他们将获得LNSC的会议。

3. 四个LNSC课程（患者7、8和9）：以2周的间隔进行2次LNSC，然后并进行化学辐射5周。在化学放疗的第2周和第4周期间，它们将接受LNSC（即化学放疗期间2个会话）。

   • 没有DLT：如果没有患者发展DLT，则研究人员将招募3名患者接受4个LNSC课程，如前所述，以确认安全性。
   • 1个DLT：如果3例患者中有1名DLT患有DLT，则研究人员将招募3名患者接受该剂量的LNSC。如果其他任何已入学的患者发展为DLT，则研究人员将在先前剂量下注册3例患者，以确认较低剂量频率的安全性。
   • 2个DLT：在给定剂量频率间隔，如果3例患者中有2例出现DLT，则研究人员将在先前剂量下注册3名患者，以确认较低剂量频率的安全性。

不良事件（AES）和剂量限制毒性（DLT）的定义，我们将根据美国胃肠道内窥镜学会（ASGE）词典（附录2）定义不良AES。 AE与LNSC的关系将使用以下四个类别进行分类：绝对相关，可能相关，不太可能相关，并且绝对没有相关。 DLT将定义为绝对或可能与冷冻疗法程序有关的任何严重或致命的不良事件（即 - 计划外入院> 10晚，重症监护病房入院> 1晚，患有不良事件的手术，由于不利而导致永久性残疾事件或死亡）。研究小组的成员将在手术后48小时与患者联系，并在评估轻度，中度和严重不良事件（AES）后1周进行检查。除了记录任何AE外，研究协调员还将与医生研究者联系，如果有任何AE报告以指导适当的临床管理。独立的数据安全监控（DSM）委员会将在研究期间每3个月审查AES，以确定AE是否绝对或可能与LNSC程序有关。此外，如果报告了严重的不良事件（SAE），则DSM将在一周内相遇，以确定SAE是否代表DLT。

研究人员将在第一次和第二次冷冻疗法之前以及化学化结束时立即获得组织形态，流式细胞仪和免疫组织化学（IHC）。研究人员将从中心获得一半的活检，而从肿瘤周围获得了一半的活检。如果患者在没有内窥镜检查的化学放疗后直接进行手术，则研究人员将从外植体标本中获得档案组织。研究人员将在4％多聚甲醛（PFA）中放置2个活检，进行TILS分析（1个中心和1个外围），4％PFA中的2个活检进行IHC分析（1个中心和1个外围），2个活检和2个活检进行探索性分析/备份。为了评估免疫原性死亡的证据，研究人员将对CRT的活检标本进行IHC，而ELISA对HMBG1的外周血进行了ELISA。病理学家对患者人口统计的看法不视而不见，治疗分配将使用标准标准和稀疏，中度或明显的TIL评分总体炎症。为了评估免疫浸润，研究人员将构建组织微阵列（TMA）阻滞并在自动免疫染色器中分析针对以下抗原的抗体：CD3，CD8，CD45R0/FOXP3和PAN-CK。

其他数据收集基线变量：基线变量将包括年龄，性别，种族，肿瘤组织学和TNM阶段，肿瘤的位置和长度，存在或不存在关键器官入侵（即 - 主动脉，气管，心脏和椎体），ECOG绩效状态，基线醇酸 - 斑点刺激性评分以及食管癌的生活质量的验证量度，EORTC QLQ-OES18。

病理/临床完整反应的评估：在新辅助化学放疗完成后，重新阶段的PET-CT和手术外植体的结果将被抽象为记录存在或不存在病理完全反应。根据我们机构的标准方案，不进行手术的患者将与活检以及PET-CT一起进行上内窥镜检查，以评估存在或不存在临床完全反应。

评估抑制功效：研究团队的成员将在每次LNSC程序后的1周与每个患者联系，以更新柔毛刺激性吞咽困难分数和EORTC QLQ-OES18。研究人员还将记录是否需要在化学放疗期间使用食管支架，肠内喂养管或肠胃外营养支持。

纳入标准：

患有局部晚期食管癌的成年患者将有资格参加该研究。符合条件的患者必须对食管腺癌，食管鳞状细胞癌，腺鳞癌或胃食管连接腺癌的组织学诊断。局部晚期食管癌将被定义为在正电子发射断层扫描（PET-CT）和IIA至IIIC的TNM阶段上没有远处转移，这是由内窥镜超声和PET-CT所定义的。

排除标准：

1. 小儿患者（年龄小于18岁）
2. 浅表食管癌
3. 无法将胃胃解压缩管传递到胃中
4. 凝血病（INR> 2或血小板计数<50,000/立方毫米）。
5. 无法提供知情同意
6. 东部合作肿瘤学组（ECOG）绩效状态≥3
7. 怀孕