高级病变中不同HPV的患病率将使用Innolipa HPV额外的V2基因分型试剂盒（Fujirebio）确定。仅涉及具有组织学证明的高级宫颈病变（2或3级上皮内肿瘤）的样品。患者出生年份，病变诊断年和组织学诊断年将记录参与的实验室，将根据协议中定义的纳入标准选择合格的宫颈样品（活检或手术标本）。仅选择具有足够生物材料的宫颈样品。选定的组织块将根据生物样品的运输规则，通过邮件（提供的预付费包络）发送到乳头瘤病毒国家参考中心（NRC）。 NRC收到后，组织块将被匿名化。 HPV基因分型后，块将返回实验室。运输成本由乳头状病毒NRC承保。

样品必须固定在4％缓冲甲醛（最多24小时）中，然后包括在石蜡中以进行组织病理学评估。在每个选定的组织学片段上，乳头瘤病毒NRC将使用Microtome进行5μm厚的切片。要制作的部分数量取决于组织学标本的大小。基因分型需要的最小表面积等同于5个部分的5μm，125 mm2。

将组织切片分组为标有2毫升螺钉管的标记。为了避免样品之间的任何污染，将用二甲苯小心地清洁小型叶片，然后在每个块之间仔细清洁95％的乙醇。

使用QIAAMP DNA迷你试剂盒（Qiagen）提取DNA后，将使用分子技术进行HPV基因型分析，以检测人乳头瘤病毒DNA。研究人员将使用Inno-Lipa HPV基因分型II（Fujirebio）套件。这是一种使用退化引物的聚合酶链反应（PCR）技术，然后在条上进行了反向杂交，在该条带上固定了32个Alpha HPV基因型的特定探针。该套件允许检测13个高危HPV基因型（HPV16、18、31、33、33、35、39、45、51、52、52、52、56、58、59、68），6个HPV风险（HPV 26、53、66、70、73、82）和14个低风险或未分类的HPV（HPV6、11、40、42、42、43、44、54、54、54、61、62、62、67、81、81、83、89） 。此外，根据Schmitt等人，J Clin Microbiol 2010发表的技术，将通过PCR Luminex分析样品。除了Alpha HPV外，该技术还允许检测60 beta和Gamma HPV。

受试者的特征包括对研究中包括的患者的描述（一方面是1972年至1982年出生的妇女，另一方面是1983年至1993年出生的妇女）将包括样本时的年龄，采样，病变CIN2或3的阶段以及组织学类型。

将使用学生测试对定量变量进行定量变量和卡方检验进行定性变量的比较，同时尊重应用这些测试的条件。

高危HPV 16或18基因型的主要判断标准的患病率将在两个年龄组的置信区间中描述。使用卡方检验，将在两个年龄组之间比较这些患病率。

在两个年龄段的置信区间中，将描述高危HPV基因型以外的高危HPV基因型的次要判断标准患病率。使用卡方检验，将在两个年龄组之间比较这些患病率。

其他分析将针对两个年龄组描述不同HPV基因型的分布。

该研究所需的样本数量是1972年至1982年间出生的妇女的606：303个样本，以及1983年至1993年出生的妇女的303个样本。

所需样品数量的计算基于以下假设：高级女性病变中HPV16和/或HPV18的患病率估计为62％。从人口健康的角度来看，引入HPV疫苗接种后的最小减少是，研究人员希望强调的是10％，即1983年至1993年在52％之间出生的妇女的预期患病率是预期的。

对于设定为80％的功率和5％的α风险，单方面的假设表述（只有患病率降低）和来自25-34岁和35-44岁女性的样本数量相等，样本数量是每个组所需的是303。

• 非暴露
  1972年至1982年出生的妇女未接触HPV疫苗接种
  干预：其他：生物样品分析
• 裸露
  1983年至1993年出生的妇女可能接触HPV疫苗接种
  干预：其他：生物样品分析

纳入标准：

• 子宫颈的高级病变
• 宫颈上皮内肿瘤2或3的组织学诊断，原位颈肌瘤
• 活检或手术标本
• 福尔马林固定ANS石蜡嵌入式标本

排除标准：

- 固定在Boin解决方案中的样品